人钙周期素结合蛋白基因亚细胞定位载体的构建和鉴定.pdfVIP

广东医学摇 圆园员员 年员员月第猿圆卷第圆圆期摇 郧怎葬灶早凿燥灶早酝藻凿蚤糟葬造允燥怎则灶葬造摇 晕燥增援 圆园员员，灾燥造援 猿圆，晕燥援 圆圆 圆怨·员苑 · 人钙周期素结合蛋白基因亚细胞定位载体的 构建和鉴定 员 员 员 员 员 圆 猿 源△ 仇长青 ，赵盈盈 ，冯珊珊 ，王聪 ，杨博 ，余月华 ，刘朋伟 ，翟惠虹 员 圆 猿 宁夏医科大学研究生学院（银川苑缘园园园源）；宁夏医科大学第二附属医院消化内科（银川苑缘园园园源 ）；上海交通 大学医学院（上海圆园园园圆缘）；源 宁夏医科大学总医院消化内科（银川苑缘园园园源） 摇 摇 【摘要】摇 目的摇 构建编码人钙周期素结合蛋白（澡悦葬糟赠月孕）基因的亚细胞定位载体并进行序列测定。方法摇 澡悦葬糟赠月孕 的模板来自人结肠癌细胞株匀悦栽原员员远 的糟阅晕粤序列，根据澡悦葬糟赠月孕基因序列设计合成引物，采用孕悦砸 方法扩增编码澡悦葬糟赠月孕 的基因片段；将澡悦葬糟赠月孕基因定向克隆到亚细胞定位载体 责悦酝灾辕皂赠糟 系列：责悦酝灾辕皂赠糟辕 灶怎糟（胞核定位载体）、责悦酝灾辕皂赠糟辕糟赠贼燥（胞质定位载体）。转化耘援糟燥造蚤阅匀缘 感受态细胞，在氨苄青霉素阳性蕴月培 α 养基平板上筛选出阳性克隆。重组质粒经孕悦砸及双酶切鉴定并进行序列测定。结果摇 从匀悦栽原员员远 的糟阅晕粤模 板扩增远愿源遭责的澡悦葬糟赠月孕基因片段，分别构建重组质粒 责悦酝灾辕皂赠糟辕灶怎糟原澡悦葬糟赠月孕、责悦酝灾辕皂赠糟辕糟赠贼燥原澡悦葬糟赠月孕， 孕悦砸及双酶切鉴定产物大小与预期值相符合，测序分析进一步表明所克隆的基因为编码 澡悦葬糟赠月孕 的基因片段。 结论摇 成功构建澡悦葬糟赠月孕基因亚细胞定位载体，这将为研究结肠癌胞核、胞质内的澡悦葬糟赠月孕功能和研究该基因异 常高表达与结肠癌发生发展的关系奠定实验基础。 【关键词】摇 澡悦葬糟赠月孕基因；胞核定位载体；胞质定位载体；基因克隆 悦燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶葬灶凿蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣澡悦葬糟赠月孕早藻灶藻泽怎遭糟藻造造怎造葬则造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶增藻糟贼燥则援 摇 匝陨哉悦澡葬灶早原择蚤灶早☆ ，在匀粤韵再蚤灶早 原 赠蚤灶早，云耘晕郧杂澡葬灶 原泽澡葬灶，宰粤晕郧悦燥灶早，再粤晕郧月燥，再哉再怎藻 原澡怎葬，蕴陨哉孕藻灶早 原憎藻蚤，在匀粤陨匀怎蚤 原澡燥灶早援 ☆ 郧则葬凿怎葬贼藻 杂糟澡燥燥造，晕蚤灶早曾蚤葬酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠，再蚤灶糟澡怎葬灶苑缘园园园源，悦澡蚤灶葬 悦燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早葬怎贼澡燥则：在匀粤陨匀怎蚤原澡燥灶早援 耘原皂葬蚤造：扎澡葬蚤澡怎蚤澡燥灶早岳圆远猿援灶藻贼 摇 摇 【粤遭泽贼则葬糟贼 】摇 韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇 栽燥糟燥灶泽贼则怎糟贼葬灶凿泽藻择怎藻灶糟藻贼澡藻澡悦葬糟赠月孕原糟燥凿蚤灶早早藻灶藻泽怎遭糟藻造造怎造葬则造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶增藻糟贼燥则泽援 酝藻贼澡燥凿泽摇 栽澡藻糟阅晕粤贼藻皂责造葬贼藻枣则燥皂澡怎皂葬灶糟燥造燥灶糟葬灶糟藻则糟藻造造造蚤灶藻匀悦栽原员员远憎葬泽责则藻责葬则藻凿遭赠燥怎则造葬遭燥则葬贼燥则赠援 粤糟糟燥则凿蚤灶早 贼燥澡悦葬糟赠月孕早藻灶藻泽藻择怎藻灶糟藻蚤灶早，责则蚤皂藻则泽憎藻则藻凿藻泽蚤早灶藻凿葬灶凿泽赠灶贼澡藻泽蚤扎藻凿援 澡悦葬糟赠月孕原糟燥凿蚤灶早早藻灶藻憎葬泽葬皂责造蚤枣蚤藻凿遭赠孕悦砸葬灶凿 糟造燥灶藻凿蚤灶贼燥贼澡藻泽怎遭糟藻造造怎造葬则造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶增藻糟贼燥则泽责悦酝灾辕皂赠糟泽藻则蚤藻泽：责悦酝灾辕皂赠糟辕灶怎糟（灶怎糟造藻葬则造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶增藻糟贼燥则）葬灶凿责悦鄄 酝灾辕皂赠糟辕糟赠贼燥（糟赠贼燥责造葬泽皂蚤糟造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶增藻糟贼燥则）援 月燥贼澡贼澡藻贼憎燥责造葬泽皂蚤凿泽憎藻则藻贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿蚤灶贼燥耘援糟燥造蚤阅匀缘 糟燥皂责藻贼藻灶贼糟藻造造泽 α 蚤灶蕴月皂藻凿蚤怎皂责造葬贼藻葬灶凿泽糟则藻藻灶藻凿憎蚤贼澡葬皂责蚤糟蚤造造蚤灶援 砸藻糟燥皂