蛋白质检测新技术———邻位连接技术及初步应用.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（８）：１１３～１１８ 蛋白质检测新技术———邻位连接技术及初步应用 １ １，２ １ １ 唐　娜 　沈志强 　管　宇 　王金良 （１山东省滨州畜牧兽医研究院预防兽医学与动物生物技术重点实验室　滨州　２５６６００） （２山东绿都生物科技有限公司　滨州　２５６６００） 摘要　邻位连接技术（ｐｒｏｘｉｍｉｔｙｌｉｇａｔｉｏｎａｓｓａｙ，ＰＬＡ），是新研发的一项高灵敏度的蛋白质体外分析 技术。该方法利用一对邻位探针（ｐｒｏｘｉｍｉｔｙｐｒｏｂｅｓ）对靶分子进行双识别，通过连接反应产生可扩 增的检测信号，以实时ＰＣＲ进行放大和检测，将对蛋白质的检测转变成为对ＤＮＡ的检测，实现痕 量蛋白的分析，具有极高的检测灵敏度和特异性。综述了邻位连接技术的原理、研究进展以及该 技术在蛋白质分析及疾病诊断领域的初步应用。 关键词　邻位连接技术　邻位探针　蛋白质分析　疾病诊断 中图分类号　Ｑ５１ 　　邻位连接技术是近几年建立的一种可以用于研究 　　ＰＬＡ技术检测蛋白质的核心是一对邻位探针。该 蛋白质的定量、定位、相互作用、修饰以及功能的新 对探针将单链 ＤＮＡ与一对蛋白识别因子相连接，使其 ［１～３］ ＤＮＡ连接技术 。该技术通过一对邻位探针将特异 可以通过免疫吸附或其他方法同步结合到一个待测蛋 性蛋白质检测转换为ＤＮＡ序列分析，可以直接分析复 ［７］ 白分子上。ＰＬＡ反应分为３步 （图１），图１中：１）样 杂的生物样品，检测灵敏度和精确度高。本文总结了 品与带有靶特异性抗体的一对邻位探针共孵育，２条邻 国外相关报道，对ＰＬＡ技术原理，ＰＬＡ技术的种类进行 位探针双双与靶相应位点结合；２）加入连接试剂和 了系统的介绍，并介绍了该方法在生物标记因子检测、 ＰＣＲ扩增试剂，在连接酶作用下使得同一目的蛋白上 蛋白质相互作用、蛋白质 ＤＮＡ相互作用以及疾病诊断 ? 的邻位探针对ＤＮＡ尾部的游离５′端和３′端与互补序 中的初步应用。 列杂交并发生邻位连接反应，形成一个环状的蛋白质? 蛋白识别分子 单链 ＤＮＡ复合物。３）采用实时定量荧 １　ＰＬＡ技术原理 ? 光ＰＣＲ扩增复合物中的单链 ＤＮＡ部分。只有在一对 １．１　ＰＬＡ技术原理 探针均与目标蛋白结合，且相互间距离足够贴近时，邻 　　ＤＮＡ连接技术早在２０世纪７０年代首次发现连接 位连接反应才能够发生，因此ＰＬＡ的非特异性检测极 酶之后便被应用于实验分析中，最早用于研究ｔＲＮＡ的 少，这一优点使得ＰＬＡ与常规ＰＣＲ或ＲＣＡ方法相比， ［４］ 分子作用机制 。此后陆续出现了多种新的连接技 具有更高的特异性和检测灵敏度。 术，如用于单核苷酸多态性标记 （ｓｉｎｇｌｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ １．２　邻位探针 ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ，ＳＮＰｓ）的 寡 核 苷 酸 连 接 分 析 　　邻位探针由蛋白结合部分和可连接的单链 Ｄ