EMMPRIN基因表达与舌鳞癌侵袭关系的研究.pdf

中山大学博士论文 EMMPRIN基冈表达与舌鳞癌侵袭关系的研究 显著降低。EMMPRIN—siRNA干扰片段转染舌鳞癌Tca8113细胞后，细胞培养上 清液中活化的MMP．9的表达量较对照组显著降低，而活化的MMP．2的表达量 不变。 结论 EMMPRIN基因表达下调降低舌鳞癌Tca8113细胞的增殖和体外侵袭能力。 抑制EMMPRIN基因的表达能够降低舌鳞癌细胞分泌和活化MMP．9，可能是 EMMPRIN基因对舌鳞癌Tea8113细胞侵袭能力影响的机制。EMMPRIN基因 表达下调对舌鳞癌Tca8113细胞的凋亡无影响。 第三部分 EMMPRIN基因转染影响舌鳞癌SCC．25细胞 侵袭能力的实验研究 研究目的 达和舌鳞癌SCC．25细胞粘附和侵袭能力的的相关性，并探讨其可能的机制。 材料和方法 的PCR上下游引物。应用PCR技术对目的片段进行扩增。电泳鉴定获得产物。 I和EcoR I限制性内切酶进行酶切使其 慢病毒载体pWPT-GFP载体使用BamH II和EcoRI限制性内切酶进行酶切，酶 线性化，EMMPRIN基因片段使用BgJ 制备及质粒转化。pWPT-EMMPRIN慢病毒载体的包装：首先制备空白慢病毒颗 粒，然后空白慢病毒颗粒转染舌鳞癌SCC-25细胞，并在荧光显微镜下检测GFP 的表达，测定慢病毒载体对SCC．25细胞的转染效率。同法将包装 细胞，Westernblot检测EMMPRIN的表达，GAPDH作为内参。 V 中山大学博士论文 EMMPRIN基因表达与舌鳞癌侵袭关系的研究 实验方法将转染pWPT-EMMPRIN慢病毒表达载体转染舌鳞癌SCC．25细胞， 36．48小时后进行相关实验。细胞粘附实验检测pWP■EMMPRIN慢病毒表达载 体转染舌鳞癌SCC．25细胞后，细胞体外粘附能力的改变。Transwell实验检测 力的改变。明胶酶谱实验检测pWPT-EMMPRIN慢病毒表达载体转染舌鳞癌 SCC一25细胞后，细胞分泌的活性MMP-2的表达情况。原位明胶酶谱实验检测 活性MMP．2表达水平。Western 中活性MMP．2和uPA的表达情况。采用SPSSl3．0统计软件包进行统计学分析。 结果 胶电泳，扩增基因片段约为800bp，与预期结果一致。EMMPRIN慢病毒表达 载体酶切结果正确，目的基因片段测序结果与设计序列完全一致。成功包装空白 慢病毒颗粒，并转染SCC-25细胞，转染后24后可见绿色荧光，以后绿色荧光 SCC．25细胞，转染后48小时，Western blot检测可见EMMPRIN稳定表达。 细胞体外侵袭能力显著增强。pWPT-EMMPRIN慢病毒表达载体转染舌鳞癌 慢病毒表达载体转染舌鳞癌SCC．25细胞后，细胞中MMP．2和uPA的表达未见 分泌到培养上清液中活化的MMP．2和uPA表达显著增加。 结论 EMMPRIN基因表达上调能够显著增强SCC-25细胞的体外侵袭能力，同时 v1 中山大学博士论文 EMMPRIN基因表达与舌鳞癌侵袭关系的研究 分泌和活化MMP-2和uPA，可能是增强其体外侵袭能力以及降低细胞粘附能力 的机制之一。 关键词：舌鳞癌；EMMPRIN；基质金属蛋白酶；尿激酶型纤溶酶原激活物； 粘附；侵袭；增殖：预后 V玎 中山大学博士论文 EMMPRIN基因表达与舌鳞癌侵袭关系的研究 Studieson betweenEMMPRINand Relationship Expression Invasionof CellCarcinoma