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大黄鱼病原哈维氏弧菌单克隆抗体的制备及其应用 郝贵杰 沈锦玉 徐洋 姚嘉赟 潘晓艺 (浙江省淡水水产研究所， 湖州 313001) 摘要：用甲醛灭活哈维氏弧菌（Vibrio harveyi ）GYC1108-1制备免疫原免疫8周龄雌性BALB/c 小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA ）对杂交瘤进行筛选， 阳性克隆经2-3次亚克隆后，共获得5株针对GYC1108-1的单克隆抗体。选取1B7制备小鼠腹水 抗体，其细胞上清及腹水效价分别为1 ∶3200和1 ∶32000 。同样用灭活的哈维氏弧菌免疫新 西兰大白兔，5次免疫后颈动脉采血，离心取血清，并用饱和硫酸铵法进行纯化，制备了兔 抗哈维氏弧菌多克隆抗体，其ELISA效价为1 ∶51200。利用1B7单克隆抗体和兔抗哈维氏弧 菌多克隆抗体以及山羊抗小鼠HRP酶标二抗，建立了检测哈维氏弧菌的三抗体夹心酶联免疫 4 吸附试验（TAS-ELISA）方法。该方法对哈维氏弧菌的最小检出浓度为1×10 个/mL。用该 TAS-ELISA方法检测大黄