植物愈伤组织培养.pdf

第六章 植物愈伤组织培养 第六章 植物愈伤组织培养 本章主要内容 本章主要内容 • 植物愈伤组织及形成过程 • 植物愈伤组织与遗传变异 • 植物愈伤组织培养条件与定向变异 第一节 植物愈伤组织及形成过程 第一节 植物愈伤组织及形成过程 •植物愈伤组织的概念 •植物愈伤组织的形态结构 •植物愈伤组织的形成过程 •植物愈伤组织的继代培养 一、植物愈伤组织的概念 一、植物愈伤组织的概念 愈伤组织 (callus)，原是指植物在伤口表面形成 的一团薄壁细胞。在组织培养中，愈伤组织指在人工 培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形 的疏松排列的薄璧细胞。 通过愈伤组织培养再分化产生再生植株是植物组织 培养的主要形式之一。几乎所有高等植物的各种器 官，如根、茎、叶和花等，以及各种组织，如皮层、 茎髓和形成层等，离体后在适当条件下都能产生愈伤 组织。 愈 伤 组 织 愈伤组织诱导不定芽 愈伤组织诱导不定芽 不定芽的生根培养 不定芽的生根培养 二、植物愈伤组织的形态结构 二、植物愈伤组织的形态结构 愈伤组织是许多异质细胞集合而成的一个无一定形 态结构的细胞聚集体。根据其性质和细胞组成的特 点，可以分为致密和松脆两种结构类型。 松脆愈伤组织都有大量的分生组织中心，进行活跃 的细胞分裂，愈伤组织内有大量的细胞间隙，细胞排 列完全无序。 坚实致密愈伤组织内无大的细胞间隙，而由管状细 胞组成维管组织。 植物愈伤组织的形态结构 植物愈伤组织的形态结构 优良的愈伤组织通常必须具备以下特性: ⑴高度的胚性或再分化能力，以便从这些愈伤组织 得到再生植株。 ⑵容易散碎，以便用这些愈伤组织建立优良的悬浮 系，并且在需要时能从中分离出全能性原生质体。 ⑶旺盛的自我增殖能力，以便用这些愈伤组织建立 大规模的愈伤组织无性系。 ⑷经过长期继代保存而不丧失胚性，以便有可能对 它们进行各种遗传操作。 三、植物愈伤组织的形成过程 三、植物愈伤组织的形成过程 从单细胞或一块外植体形成典型的愈伤组织，大 致要经历4个时期: 诱导期 分裂期 形成期 分化期 1、诱导期(起动期) 1、诱导期(起动期) • 诱导期(induction stage)是细胞准备进行分裂的 时期,通过一些刺激因素和激素的诱导作用，使处 在静止状态的细胞合成代谢活动加强，迅速进行 蛋白质和核酸物质的合成。此期间细胞的大小变 化不大。 • 诱导期的长短和诱导分裂的难易程度，因植物 种类、外植体的生理状况和外部因素而异。 • 外源生长调节物质对诱导细胞开始分裂效果最 好，最常用的有2,4-D、NAA 、IAA和细胞分裂素 等。 2、分裂期 分裂期(division stage) 是不断增生子细胞的过程。 其特征是:细胞分裂快，结构疏松，缺少有组织的结 构，颜色浅而透明。主要表现如下: ①细胞的数目迅速增加。 ②每个细胞平均鲜重下降。 ③细胞体积小，细胞内无液泡 ④细胞核和核仁增至最大 ⑤细胞中RNA含量减少，而DNA含量保持不变。 ⑥组织的总干重、蛋白质和核酸含量大大增加，新细胞壁的合成 极快。 3 、形成期 形成期(formation stage)是指外植体的细胞经过诱导、 分裂形成了无序结构的愈伤组织的时期。 这一时期愈伤组织内细胞有以下特点是: ①大而不规则、高度液泡化，整个组织是比较松散的。 ②表面以下约5～10个细胞是细胞生长的中心这些中 心是愈伤组织的主要生长部位。 3 、形成期 若诱导条件不同，愈伤组织的形态和物理性质也有 一定的变化，有的紧密坚实，有的疏松脆弱。加入高