针刺肝俞、肾俞对脑缺血再灌注模型大鼠血浆中NPY含量以及脑组织中NPYmRNA表达的影响.pdfVIP

引 言 脑卒中是一种全球性的常见病、多发病，在我国居三大死因之首，每年我国 死于脑卒中的人数高达100万，其中缺血性卒中约占75％，另有约3／4的存活者 不同程度地丧失劳动能力，该病严重威胁着人类的健康和生存质量。与其他脑血 管病相比，缺血性脑血管病具有“三高一低”的特点，即高发病率、高致残率、 高复发率、低死亡率。我国每年新发病人数约为120万～150万，几乎所有的病 例均遗留不同程度的残疾，从经济学、社会学角度考虑，缺血性脑血管病对人类 的威胁较其他类型的脑血管病更大。 由于脑缺血损伤的病理生理机制非常复杂，近年来研究表明，脑缺血再灌注 损伤的主要病理生理机制包括：自由基生成增加“1，兴奋性氨基酸毒性啪、细胞内 钙超载。1和NO的神经毒性作用“1等诸多方面。目前有研究发现一种神经肽Y(NPY) 与脑血栓致梗死的发生、发展有密切的关系。NPY及其受体是广泛分布于哺乳动 物脑和脑血管周围，且认为在血浆和脑组织含量较高，具有强烈的收缩脑血管作 用，经大鼠颈内动脉灌注NPY可使大鼠脑血流减少40％～8096嘲，因此其在缺血性 脑血管病致病过程中起重要作用。有人峨”发现NPY可在大鼠巨核细胞内合成，一 血液循环中NPY大部分来自血小板，并进一步证实大鼠血小板中存在与NPY合成 有关的mRNA，而且血小板释放的NPY可引起血管收缩，血栓形成。另有研究“” 过程中经常有血管内膜损伤，进而引起血小板聚集并伴有NPY大量释放入血，致 使血浆中NPY增高，血管平滑肌收缩，导致组织缺血，血栓形成，堵塞血管，使 脑组织缺血缺氧，加重病情。由此可见，NPY在脑缺血的发生及不同发展阶段的 病理变化过程中可能起着关键的调节作用． 针灸疗法作为治疗脑血管疾病的有效手段，在我国已有几千年的历史，并且 在国外得到广泛应用。通过对以往有关缺血性脑血管疾病的机理研究进行回顾性 分析，发现大多文献报道都集中于“病位”和“标实”部份的研究，取穴多采用 头针和四肢穴位，如“百会”、。足三里”等，而对以其发病根本“肝肾阴虚” 立论，并同时取用肝俞、肾俞二穴治疗此病的研究未见报道。本研究通过针刺肝 俞、肾俞对脑缺血再灌注损伤模型大鼠血浆中NPY含量及脑组织中NPYmRNA表达 的测定，并结合相关文献，旨在从致病的根本这一方面对本病的发病机制和治病 7 机理进行深入的探讨，为临床选用肝俞、肾俞治疗缺血性脑卒中提供科学依据· 8 正 文 材料与方法 1材料 1．1动物 心所提供。 1．2药品及试剂 1．2．1分子生物学实验用试剂与仪器 1．2．1．1主要试剂 DEPc(焦碳酸二乙酯) BBI Trizol试剂 上海生工生物工程技术服务有限公司 M-Mulv反转录酶 MBI RNA酶抑制剂 MBI d(T)16 上海生工生物工程技术服务有限公司 Oligo RT-PCR引物 上海生工生物工程技术服务有限公司合成 NPY：NPYf：57一TAGGTAACAAACGAATGGGGCT一3’ 7 NPYr：57一AGGATGAGATGAGATGTGGG一3 cTCTATGcC从一3’ B--Actin：B--Actinf：57—cGTAAAGAC AAA AT一3’ B—Actinr：5’一AOCCATOCC TGTGTC PCR扩增试剂： 上海生工生物工程技术服务有限公司 (10XPCRBuffer、dNTP