骨折合并脑外伤时IGF-Ⅱ对骨折愈合的影响.pdf

青岛大学硕士学位论文 材料与方法 一、材料 IGF．1I检验试剂盒(ELISA法)北京中吴时代生物技术中心 血清 青岛大学医学院附属医院创伤骨科、神经外科住院患者 Ml【3 酶标仪Multiskan 恒温孵育箱常州国华电器 全自动微孔洗涤机上海新波生物技术有限公司 二、方法 (一)、血清标本收集 血清标本来源于52例住院患者，正常组、单纯骨折组、骨折合并脑 外伤组、单纯脑外伤组各13例。单纯骨折组的入选标准为四肢长管状骨骨 折，单纯脑外伤组的入选标准为有昏迷史，头痛、呕吐，症状持续3天以 上。年龄20．70岁之间，平均42岁。每例于受伤后1、3、7、14天抽取外 15分钟，收集分离 周静脉血5ml，采血后室温凝固30分钟，离心1000×g 血清，于一20。C冷冻保存。 (二)、IGF-Ⅱ的测定 l、试剂的准备 标准品液每管中加人蒸馏水150ul；洗涤液用l：20稀释；底物工作 液于显色前5．10分钟将OPD放入，每片加液5ml。 2、 检测程序 2、1建立标准曲线 设标准孔8孔，每孔中各加入样品稀释液100ul，第一孔加标准品 ’．‘ 100ul，混匀后用加样器吸出100ul，移至第二孔。如此反复作对倍稀释至 空白对照。 2、2加样洗板 2 材料与方法 待测品孑L中每孔各加入待测样牖100ul，将反应板蹬于37℃120分 钟，用洗涤液将反应板充分洗涤4．6次，在滤纸．I．．印于。每孔中加入第一 抗体工作液50ul，再将反应板充分混匀后置于37％60分钟，再用洗涤液将 反应板置于37℃60分钟，再洗板，每孔中加入底物工作液100ul，置37℃ 值(OD值)。 2、3画出标准曲线 轴，oD值作为Y轴，画出标准曲线。 2、4测值 通过样品OD值在标准曲线图上求出相应IGF．II的含量。 三、统计学分析 10．0forwindows 检验数据用SPSS 2000统计软件包进行处理、t检验。所 有计量资料以X±S表示，以P0、05表示差异有显著性。 3 青岛人学硕士警f矗i芑足 实验结果 表1人血清IGF．Ⅱ含量的变lh(ng／mUX±S) 图1人血清IGF-II含量的变化直方图 1不同时期各组IGF一Ⅱ含量的测定结果见表1。 后第3天血清IGF一Ⅱ含量升高，1周时为正常组的2倍，2周时为正常组的 3倍。骨折合并脑外伤组伤后第3天血清IGF一Ⅱ含量明显升高，为正常组的 o 2倍，1周可达5倍，2周可达7倍，见(图1 4 吱巧：呜‘i5{1 3统计学处理 3、l实验第l天，各组间数据行两两t检验，骨折合并脑外伤组与单纯骨折组、 单纯脑外伤组及正常组血清IGF．Ⅱ含量均有显著性差异(po．05)，单纯骨折组 和单纯脑外伤组与正常组均无显著性差异(P0、05)，单纯骨折组与单纯脑外 伤组均无显著性差异(p0、05)。 3、2实验第3天，各组间数据行两两t检验，骨折合并脑外伤组与单纯骨折组、 单纯脑外伤组及正常组血清IGF-Ⅱ含量均有显著性差异(po．05)，单纯骨折组 和单纯脑外伤组与正常组均有显著性差异(p羽．05)，单纯骨折组与单纯脑外伤组 无显著性差异(PO、05)。 3、3实验第1周，各组间数据行两两t检验，骨折合并脑外伤组与单纯骨折组、 单纯脑外伤组及正常组血清IGF一Ⅱ含量