第九章 亲和色谱.pdf

《生化分离工程》 Bioseparation Engineering 第9章 亲和色谱 生化分离过程的一般流程： 原料液 细胞分离(离心，过滤) 路线一 路线二 细胞－胞内产物 清液－胞外产物 路线一B 细胞破碎 路线一A 包含体 碎片分离 溶解(加盐酸胍、脲) 粗分离(盐析、萃取、超过滤等) 复性 纯化(层析、电泳) 脱盐(凝胶过滤、超过滤) 浓缩(超过滤) 精制(结晶、干燥) 9. 亲和色谱 9.1概述 9.2亲和色谱的原理 9.3亲和色谱的介质 9.4亲和色谱的操作 9.5亲和色谱的应用 9.1概述 生物亲和作用和亲和结合： 亲和作用：生物分子间的特异性相互作用。 亲和结合：通过亲和作用发生的结合。 生物亲和作用的特点：特异性高 生物分子间特异性作用的利用：亲和纯化技术 定义：利用亲和结合原理进行生物物质分离纯化的技术。 内容：除其代表为亲和色谱外，还有 ①亲和过滤 ②亲和分配 ③亲和反胶团萃取 ④亲和沉淀 ⑤亲和电泳 亲和色谱（Affinity Chromatography ，AFC ）是专门 用于纯化生物大分子的色谱分离技术，它是基于固定相的 配基与生物分子间的特殊生物亲和能力的不同来进行相互 分离的。 亲和色谱特点： （1）具有其他分离技术所不能比拟的高选择性； （2 ）操作条件温和，能有效地保持生物大分子高级结构 的稳定性； （3 ）对活性样品的回收率较高。 亲和色谱分离法中经常被采用的生物亲和关系有： （1）酶：底物、底物类似物、抑制剂、辅酶、金属离子； （2 ）抗体：抗原、病毒、细胞； （3 ）激素、维生素：受体蛋白、载体蛋白； （4 ）外源凝集素（Lectin ）：多糖、糖蛋白、细胞表面受 体蛋白、细胞； （5 ）核酸：互补碱基链段、组蛋白、核酸聚合酶、核酸结 合蛋白； （6 ）细胞：细胞表面特异蛋白、外源凝集素。 9.2亲和色谱的原理 蛋白质参与亲和作用的机理和条件： 机理： 机理尚不完全清楚，一般认为象钥匙和锁孔的关系。 条件： （1）必备条件是结合部位，凸起的结构（钥匙）或凹陷 的结构（锁孔）和亲和作用； （2 ）重要条件是各种相互作用：见后图