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Wq医科人学硕J。学位论文
Earle’S液(Sigma公司)
BWW储备液
BWW培养液
乳酸钠(北京化工厂)
丙酮酸钠(北京化工厂)
KH2P04(北京化工厂)
HEPES盐(上海生工)
孕酮(华北制药厂)
青霉素(上海生工)
链霉素(上海生工)
PBS缓冲液
牛血清白蛋白组份V(上海生工)
FITc—PSA(Sigma公司)
3试剂的配制
3．1BWW储备液的配制
NaCl KCl
5．5409 CaCl2·2H37℃OKH2P04
0．3569 0．2509
0．1629MgS04·7H200．2949酚红lml用蒸馏水溶解至1000ml
3．2BWW培养液的配制
NaHC03
HEPES
白蛋自350mg青霉素10000单位硫酸链霉素10rag5．29
用100mlBWW储备液溶解上述药品，加温至37。C，通入c02气体调
整PH值至7．4。
3．3增补的Earle、S培养液的配制
Earle、S液平衡盐溶液中溶解。
碳酸氢钠100mg加入50ml
4主要仪器设备
DK(CUB00)电热恒温水槽(上海益恒实验仪器有限公司)
LD4—2A台式离心机(北京医用离心机厂)
PHS一3C精密PH计(上海精密科学仪器有限公司)
BIO．TE
UV755B紫外可见分光光度仪(上海分析仪器总厂)
2
Wq医科人学硕J。学位论文
FINNPIPTTE
DIG
ITAL数字显示移液管(芬兰)
JY电子天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂)
ELX800酶标仪(美国)
SANYOMCO—15AC
C02培养箱(日本)
伟力全自动电脑精子分析仪(北京伟力新世纪科技发展有限公司)
KJ—B快速旋涡混匀器(江苏姜堰市健康医疗器具有限公司)
BCD一268H海尔电冰箱(青岛海尔电冰箱股份有限公司)
FORMA
SCIENTIFIC超低温冰箱(美国)
流式细胞仪(美国)
OPTICAL
CO．LTD日本)
OLYMPUS—IXTO荧光显微镜(OLYMPUS
5试验方法
5．1ELISA法筛选IgG类AsAb阳性精浆
a．手淫法采集被检者全份精液标本，置37(2水浴箱完全液化，500×g
离心10分钟，备用。
b．蒸馏水按20：1的比例将浓缩洗涤液稀释备用，同时配制含5％小牛
血清的样品稀释液。
c．待检标本数目取相应的抗原包被微孔板，同时取3个微孔板分别作
为空白对照、阴性对照、阳性对照。除阴、阳性对照孔外，每孔加样品稀
释液50ul，待检精浆50“l。阴、阳性对照孔分别加阴、阳性对照液i00
ul，混匀。用封膜覆盖反应板，置3TC温育40分钟。
u
d．用配好的洗涤液洗板4次，3001／孑L／次，每次3分钟，拍干。
e．每孔加酶结合物2滴，充分混匀后，用封膜覆盖，置37。C温育30
分钟。
f．甩净孔内液体加洗涤液洗板，洗涤方法同步骤4。
ul，混匀后室温下避光反应10分钟。
g．每孔加显色剂A、B各50
1，终止反应。
h．每孔加
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