vWF促进intein剪接的BDD-FVIII的分泌和活性vWF-药学学报.PDFVIP

药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2010, 45 (5) : 595600 ·595 · vWF 促进intein 剪接的BDD-FVIII 的分泌和活性 * 朱甫祥, 杨树德, 刘泽隆, 缪 静, 屈慧鸽, 迟晓艳 (鲁东大学生命科学学院, 山东 烟台 264025) 摘要: vWF 是由巨核细胞和血管内皮细胞合成的糖蛋白, 其主要功能之一为凝血VIII 因子 (FVIII) 的载体, 防止后者被血浆酶降解。作者最近的工作证明intein 可应用于双载体转移B 结构域缺失型FVIII (BDD-FVIII) 基 因, 通过翻译后的蛋白质反式剪接形成完整的功能性 BDD-FVIII 蛋白。为了研究 vWF 对于 intein 连接的 BDD-FVIII 分泌和活性的影 , 通过intein 融合的BDD-FVIII 重、轻链基因和vWF 基因共转染培养的293 细胞, 采用ELISA 观察了分泌至培养上清液中的由intein 剪接的全长BDD-FVIII 抗原量, 并用 Coatest 检测了由其产 生的活性。结果显示, vWF 基因共转染细胞上清液中, 全长 BDD-FVIII 抗原量为 (235 21) ng·mL−1, 活性为 ( 1.98 0.2) u·mL−1, 明显高于未转染vWF 的细胞[( 110 18) ng·mL−1 和 ( 1.10 0.15) u·mL−1], 也明显高于单独转 染BDD-FVIII 基因的对照细胞[( 131 25) ng·mL−1 和 ( 1.22 0.18) u·mL−1], 表明vWF 基因共转染可显著改善双 载体转BDD-FVIII 基因后intein 剪接的BDD-FVIII 蛋白的分泌和生物活性。为基于蛋白质剪接的断裂BDD-FVIII 基因转移的甲型血友病基因治疗研究中, 应用vWF 基因共转移以提高治疗的功效提供了依据。 关键词: von Willebrand 因子; 凝血VIII 因子; 共转染; 分泌; intein; 蛋白质反式剪接作用 中图分类号: Q7; R55 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (2010) 05-0595-06 vWF improves secretion and activity of intein spliced BDD-FVIII * ZHU Fu-xiang , YANG Shu-de, LIU Ze-long, MIAO Jing, QU Hui-ge, CHI Xiao-yan (Life Science College of Ludong University, Yantai 264025, China) Abstract: As synthesized by vascular endothelial cells and megakaryocytes, the von Willebrand factor (vWF) plays an important hemostatic role in the binding t