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茶树叶绿体DNA的PCR-RFLP反应体系优化-食品科学
※工艺技术 食品科学 2013, Vol.34, No.06 73
茶树叶绿体DNA 的PCR-RFLP反应体系优化
*
陈盛相，齐桂年 ，李 欢
( 四川农业大学园艺学院茶学系，四川 雅安 625014)
摘 要：通过正交设计对影响茶树聚合酶链反应- 限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)反应体系的主要因素进行优
化，快速确立适合茶树叶绿体DNA PCR-RFLP分析的扩增体系和酶切体系。结果表明：最佳PCR扩增体系为100ng
模板DNA 、200μmol/L dNTPs 、1.5mmol/L MgCl 、50ng叶绿体引物、3U TaqDNA聚合酶、加ddH O至25μL ；最佳酶
2 2
切体系为6μL扩增产物用量、2U 限制性内切酶量、1×限制性内切酶buffer 、加ddH μ
2O至15 L ，37℃酶切6h 。利用优
化的反应体系，对30个茶树品种叶绿体DNA进行PCR-RFLP扩增，可获得清晰扩增图谱和多态性酶切图谱。
关键词：茶树；叶绿体DNA ；PCR-RFLP ；优化
Optimization of RFLP-PCR Reaction System for cpDNA in Tea Plants
*
CHEN Sheng-xiang，QI Gui-nian ，LI Huan
(Department of Tea Science, College of Horticulture, Sichuan Agricultural University, Ya ’an 625014, China)
Abstract ：Optimal reaction system of PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) for cpDNA in tea plants was
investigated by orthogonal array design. Results showed that the optimal amplification system was 100 ng DNA template,
200 μmol/L dNTPs, 1.5 mmol/L MgCl , 50 ng primer, 3U Taq DNA polymerase, and addition of ddH O up to total volume
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of 25 μL. The optimal digestion system included 6 μL amplified product, 2 U endonuclease, 1 × endonuclease buffer in
digestion solution, digestion time of 6 h and digestion temperature of 37 ℃, and addition of ddH2O up to total volume of 15
μL. Under the optimal reaction system, 30 camellia cultivars were analy
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