丙酮醛对人牙周膜成纤维细胞基因表达影响地实验的研究.pdfVIP

刺激(包括不同诱导、不同治疗手段)下的细胞内mRNA或逆转录后产生的cDNA 进行检测，从而对这些基因表达的个体特异性、组织特异性、发育阶段特异性、 分化阶段特异性、病变特异性、刺激特异性进行综合的分析和判断，迅速将某个 或几个基因与疾病联系起来，极大地加快这些基因功能的确定，同时可迸一步研 究基因与基因间相互作用的关系。 2．2基因芯片应用 Schena等通过双色差示表达系统，研究人T淋巴细胞在热休克条件下和佛波 酯作用下1046个未知序列的cDNA基因诱导表达的情况，并对诱导表达的cDNA 进行测序，再与已知基因进行比较。结果发现，热休克诱导了已知热休克蛋白基 因表达，其中包括分子伴侣和分子降解的中问体。同样，佛波酯引起了佛波酯调 节基因的信号传导途径特征基因表达，如激活细胞的磷酸酯酶和细胞因子KB1 等。另外，还发现3个低表达的已知基因和4个低表达的新基因可能与该途径有 判71。Gray等嗍报道通过测定药物使用前后mRNA水平的变化，分析了激酶抑制 剂对酵母大规模基因组的影响，而Matron等191报道了免疫抑制药物FK506的基 因表达模式特征，与此相同的模式在携带FK506靶基因无效突变的酵母细胞中 也能观察到，从而确定了一种基因功能通过遗传和药理作用消除后可导致基因 表达的类似变化。Clarke等【10】用基因芯片研究了肠癌患者化疗前和治疗期间肿瘤 基因表达情况，发现丝裂霉素c和5．氟尿嘧啶治疗均可使糖苷合成酶和尿嘧啶 一DNA糖基酶的基因表达增加。该研究提示，这类研究既有助于阐明药物的作用 机制，也有助于确定药物作用的靶基因，为新药研究提供线索。 2．3基因芯片在牙周病中的应用 牙周致病菌内毒素是牙周炎的重要起动子，在牙周炎的发生发展中起重要作 用。国内吴织芬等㈣㈦利用点样数为512的基因芯片研究了中间普氏菌内毒素 刺激人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)前后基因表达情况，筛选出了8条下调基 因及6条上调基因。其中部分基因与蛋白激酶、蛋白磷酸酶、转录调控、凋亡等 有关。说明中间普氏菌内毒素刺激人牙周膜成纤维细胞后影响牙周膜成纤维细胞 正常的生理功能。 综合以上情况，说明利用基因芯片研究丙酮醛刺激人牙周膜成纤维细胞后基 因差异表达是完全可能的。 不同浓度丙酮醛对人牙周膜成纤维细胞活性的影响 引 言 人牙周膜成纤维细胞(human ligamentfibroblasts，HPDLFs)是 periodontal 牙周组织的主要组成部分，在牙周组织的正常代谢和修复再生过程中起重要作用 报道较多，但在方法上仍有些不同【13q71。本试验旨在通过HPDLFs细胞原代培养 为下一步实验提供实验材料，观察其生物学性状，并研究不同浓度丙酮醛对人牙 周膜成纤维细胞活性的影响，为认识其在牙周炎发病中的作用提供一定的实验依 据。 材料与方法 1实验材料及主要仪器设备 DMEM培养基(Gibeo，USA) 胰蛋白酶(Gibco，USA) 小牛血清(兰州民海生物工程有限公司) 抗波形丝蛋白和抗细胞角蛋白单克隆抗体(福州迈新公司) 2％苔盼蓝染液(Sigma公司) SP免疫组化试剂盒(Vector,USA) 二氧化碳恒温培养箱(Heraeus，Germany) 医用净化工作台(苏州净化设备厂) 倒置相差显微镜(Olympus，Japan) 丙酮醛(Sigma公司，原始浓度40％) 2实验方法 2．1 HPDLFs原代培养及鉴定 2．1．1 HPDLFs原代培养，组织块培养法 HPDLFs原代培养人牙周膜取自昆明医学院第一附属医院12腔外科门诊因正 畸需要拔除的双尖牙或埋伏牙，患者年龄在11～15岁的范围。所选牙齿均无龋 坏、尖周炎及牙周炎。拔牙前病人用洗必泰漱口，再用l％碘酊和酒精局部消毒。 拔牙后将牙体冠部向下、根部向上立即在无菌条件下生理盐水反复冲洗牙根部， 然后将其置于无血清的DMEM液中保存备用。于超挣台内用无血清的DMEM 液漂洗2次，浸入含15％FBS的DMEM培养基中，在平皿内用尖刀片刮取根中 保持其湿润，将之平铺在15ml养瓶瓶底，翻转培养瓶加入5ml含15％FBs、青 条件为5％C02、95％空气、3712、饱和湿度。2～3h后翻转培养瓶继续培养。 3d后观