补肾活血方对体外培养大鼠PCOS颗粒细胞VEGF表达地影响.pdfVIP

引 言 多囊卵巢综合征(polycystic ovary 以月经稀发、不孕和卵巢增大为主要临床表现的妇科常见病、多发病。 在育龄期女性中患病率为5％一1 0％“1，其中20-30岁妇女占总数的 其特征性病理生理学改变主要是促性腺激素分泌异常，高雄激素血 症，胰岛素抵抗与高胰岛素血症，肥胖以及卵巢局部调控因子异常。 卵巢局部表现为优势卵泡发育障碍，卵巢白膜变厚，内膜增生，卵泡 破裂受阻。目前多囊卵巢综合征的西医治疗主要针对促排卵、降雄激 素、降胰岛素治疗。但即使诱发排卵率较高，而妊娠率不高，受孕后 流产率和畸胎发生率明显高于正常排卵妊娠。大量中医临床研究报道 表明中药治疗PCOS具有肯定的疗效，且不存在副作用和耐药性等问 题。研究已经表明，中药可调节内分泌系统，对PCOS的治疗颇具潜 力，但中药的作用机制尚不明确，因而影响了临床的推广应用。 现代医学认为，在正常的生殖生理中，卵巢受垂体激素(FSH和 LH)的刺激，周期性的出现卵泡发育、成熟、排卵、黄体的形成，在 这一过程申，甾体激素、多肽激素、细胞因子、生长因子等物质通过 自分泌或旁分泌形式在卵泡的成熟和排卵的顺利实施中发挥着重要 endothelialfactor， 的作用。血管肉皮生长因子(Vascular growth VEGF)是近年来发现的作用于血管内皮细胞的高效促有丝分裂因子， 目前研究证实，该因子广泛表达于生殖系统各器官，参与卵巢功能的 调节、受精、胚胎发育及着床等过程，在卵泡的生长发育、排卵及闭 锁过程中发挥重要作用。 本课题旨在结合现代医学对PCOS发病机理研究的进展，建立以 细胞模型，将补肾活血大鼠含药血清对其干预，运用原位杂交技术检 活血方治疗PCOS对颗粒细胞影响的部分分子机制。 第一部分BSHXF含药血清对体外培养大鼠颗粒细胞 活力影响实验研究 1．材料与方法 鼠，由湖南中医学院动物实验中心提供。 1．2药物与试剂： 1．2．1药物： 09，泽泻1 109，桑寄生lOg，地龙109，泽兰109，路路通109，原 药共9 至100ml，制成含生药浓度0．99／m1的药液，由中西结合实验室制备， 批号 1．2．2主要试剂： HcG(绒促性素)(由山东北大高科华泰制药有限生产，j比号 0311214)： HMG(尿促性素)(由丽珠集团丽宝生物化学制药有限公司生产， 批号040301)； RPMI一1640(sigma产品)；胎牛血清(杭州四季青)； 孕马血清促性腺激素(PMSG，杭州四季青)； E：、P放射免疫检测试剂盒(北京东雅生物试剂公司)等． 1．3主要设备及积器： SCIENT．SB一5200超声清洗机(上海新芝科研所)； KF-35高压灭菌锅(湘仪公司)，高压灭菌烤箱(湘仪公司)； 电热恒温干燥箱(湖北黄石医疗仪器厂，型号sKG——01)； 超净3-作台(苏州生产，型号s1卜cJ——2FD)： co：培养箱(德国贺利民生产，型号lleracell)； 恒温水浴箱(浙江省余姚市检测仪表厂生产，型号XWT)； siamR水平式离心机； Eppendorf台式高速冷冻离心机(德国)； TG3288光学读数天平(湘仪天平仪器厂)： 双目倒置相差显微镜(重庆光电仪器总公司生产，型号 xDs——1B)；实体显微镜； WCllScan MK3全自动酶标仪； 眼科解剖器械及细胞培养(板、皿、瓶)所周相关器皿等。 1．4含药血清的制备：60天sD清洁级雌性大鼠12只，平均体 重252．32 4-0．345(g)，随机分为两纽：中药组6只，空白组6只。 于每天同一时间禁食不禁水4小时后，中药组按99／kg体重灌服．BSHXF 药液，空白组按99／kg体重灌服纯水，每天一次，连服五天。末次灌 药(水)1小时后在无菌条件下取颈动脉血，血液密封