用圆二色光谱研究蛋白质与小分子作用后的构象变化.docxVIP

用圆二色光谱研究蛋白质与小分子作用后的构象变化实验目的了解圆二色（CD）光谱研究蛋白质二级构象的基本原理和方法。能设计实验用CD光谱检测蛋白质与小分子作用后的构象变化，能用简单方法计算二级结构中螺旋的含量。实验原理CD光谱的基本知识圆二色性是研究分子立体结构和构象的有力手段。在一些物质的分子中，没有任意次旋转反映轴，不能与镜像相互重叠，具有光学活性。电矢量相互垂直，振幅相等，位相相差四分之一波长的左和右圆偏振光重叠而成的是平面圆偏振光。平面圆偏振光通过光学活性分子时，这些物质对左、右圆偏振光的吸收不相同，产生的吸收差值，就是该物质的圆二色性。圆二色性用摩尔系数系数差ΔεM来度量，且有关系式：ΔεM = εL – εR，其中，εL和εR分别表示左和右偏振光的摩尔吸收系数。如果εL – εR 0，则ΔεM为“+”，有正的圆二色性，相应于正Cotton效应；如果εL – εR 0，则ΔεM为“-”，有负的圆二色性，相应于负Cotton效应。由于这种吸收差的存在，造成了矢量的振幅差，因此从圆偏振光通过介质后变成了椭圆偏振光。圆二色性也可用椭圆度θ或摩尔椭圆度[θ]度量。[θ]和ΔεM之间的关系式：[θ]=3300*ΔεM圆二色光谱表示的[θ]或ΔεM与波长之间的关系，可用圆二色谱仪测定。一般仪器直接测定的是椭圆度θ，可换算成[θ]和ΔεM：[θ] = 100θ/clΔεM = θ/33cl