急性冷应激大鼠组织和细胞热休克蛋白90表达与应激性损伤机理的研究.pdf

(”在冷刺激12h后．糖皮质激素下降缓慢仍保持在较高水平。 (2)在冷刺激12h后主动脉纽织，脾脏和外周血淋巴细胞HSP90表达增加， 同时HsPgo血浆浓度明显升高。 量升高，丰动咏内皮细胞损伤加重。确定急性冷刺激12h后为本实验的大鼠主 动脉内皮细胞损伤模型。 二、外源性HSPgO诱导冷应激损伤后大鼠主动脉内皮细胞炎症因子表达 的机制 通过观察外源性HSP90刺激冷应激损伤后大鼠主动脉内皮细胞的TLR一4蛋 白和TNF—u和IL6炎性因子mRNA的表达，及TLR一4特异性阻断抗体干预后 IISP90诱导内皮细胞炎性细胞因丁表达的变化，探讨HSP90启动TLR一4先天性免 疫反应参与急性冷应激后主动脉内皮细胞损伤。 方法：采用原代培养急性冷刺激后各组{二动咏血管内应细胞．用外源性的 FI liSP90刺激血管内皮细胞．WeSteFblotlng方法检测备组内应细胞1LR一4蛋白表 达，用荧光定量PCR检测rxl-_o和ii。6炎性细胞因子的表达及TLR一4特异性阻断 6炎性细胞因子表达的变化。朋ELISA 抗体干预后血管内皮细胞释放TNF一口和IL 法检删细胞液中LDH的浓度。 结果；在急性冷刺激[2h后大敏主动脉组织中在0h组TLR4蛋白表达量为 93±0 (O69：L0 05。在i2h组表达量为(O22)和24h 06)比对照组升高，pO 95±0 0I)：ffSI“30处理后各组细胞的炎 组表达量(0 25)比对照组明显升高(p(0 症因子rNFa和TL-6mRNA表选量oh组(6．3I=063和7．31±015)倍：12h组分 别昆(824±017和10I±0111：24h组(912±016和11I±015)，各组均上调t比 31±7 24±91 01)。0h组(42253)IU／L：12h组是(5687)lUlL： 刘照组明显51高(pO OI)。 2,th组(59812±916)IU／L备组均上调，比对照组明显升高(pO 第二部分小结： R{表达刊高． (I)外源性的}lSP90痨导冷应激损伤后太鼠主动脉内皮细胞TL mlCNh和I卜6mRNA [L12h组和24h组比对照组¨JH蛋白表达量明显升高tTNF—a 表达明显升高，LDH活性爿高。 ∽}}JTjRI特异性抗体Ⅲ断儿R4后．抑制㈣，90诱导的各纽内皮绑胞炎性脚 8 ，’IW mRNA和IL-6mR、,A柱达。 摘要 (3)1【刚介导HSP90诱导急性冷刺激后大鼠主动脉内皮细胞损伤和炎性因子表 达。 三、外源性HSP90介导急性冷应激大鼠主动脉内皮细胞自身免疫损伤的 机制 通过观察外源性的】ISP90介导冷应馓损伤后大鼠脾脏树突状细胞 (Dendritlc cell．DC)成熟和抗原迷呈能力增强，脾脏+r淋巴细胞活性和CD41 淋巴细胞弧型的改变。以及lISP90介导的应激损伤后特异|生的细胞毒性|细胞， 对大鼠主动脉内皮细胞的损伤的作厢。井进一步观祭HSP90抗原递呈能诱导具有 C1728 细I魁毒性作辟|的CB4 T淋巴细胞增值。探1j,tHsFgo通过抗原提呈澈活获得性 免疫反应．参与大鼠急性冷刺激后主动脉内皮细胞损伤机制。 外源性HSP90对冷应激损伤后大鼠脾脏树突状细胞和T淋巴细胞功能影 响 方法：分离培养冷刺激后大鼠脾脏Dc和T淋巴细胞。流式细胞仪检测Dc 细胞的共同刺激分子cD88百分比，混合淋巴细胞反应(Ml。R)