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大环内酯类药物抗菌作用分子机制及其支原体耐药性研究进展 吴聪明 中国农业大学动物医学院 大环内酯（Macrolides）是由链霉菌产生或半合成的一类以一个大环内酯为母体，通过羟基，以苷键和1～3个糖分子相连弱碱性抗生素。按其内酯环上碳原子数的不同，分为十四、十五和十六元环内酯抗生素。自1952年Lilly公司将红霉素成功开发上市以来，迄今已开发出大环内酯药物逾百种，用于临床的已有十几种。十四、十十desosamine，德糖胺）侧链与23S rRNAⅤ域A2058和A2059（按E.coli核苷酸序列编号）分子上的氮原子形成氢键。23S rRNAⅤ域2611-2057位的碱基尤其是2057位的核苷，也可能与十四元内酯环C5位的脱氧氨基糖形成氢键（18），还可直接与内酯环产生疏水作用（16）。此外，脱氧氨基糖侧链还能与G2505的磷酸骨架发生相互作用，十六元内酯环C5位的碳霉胺糖-碳霉糖（mycaminose-mycarose）侧链也能与2058位的腺苷形成氢键，表明该位置核苷是所有大环内酯药物的主要结合部位之一。泰乐菌素、碳霉素A（carbomycin A）和螺旋霉素C5位的碳霉胺糖-碳霉糖还可能与23S rRNAⅤ域的其它区域产生疏水作用。内酯环C5位的糖基与2057-2059之间的相互作用可解释为什么该部位的核苷突变或2058位腺苷二甲基化可造成大环内酯类药物耐药性（18）。内酯环与核糖体之间的相互作用可占药物自由结合能的25%（19）。其中内酯环与23S rRNAⅤ域2057-2059位碱基形成的疏水作用尤为突出（19）。Haloarcula marismortui的核糖体大亚基与十六元环泰乐菌素、碳霉素A和螺旋霉素形成的复合体结晶结构衍射（16）结果表明，内酯环C6位的乙醛基与23S rRNAⅤ域A2062的N6形成了一个可逆性的共价键，从而增强了这些药物的结合能。这种相互作用在十四元环红霉素和十五元环阿齐霉素不存在，因为它们内酯环的C6位是一个羟基或酯基，该结合作用可解释为什么细菌23S rRNAⅤ域2062突变可造成十六元环耐药而对十四、十五元环敏感性无影响。 酮内酯是最近开发出的新三代大环内酯类药物。它们以内酯环C3位的克拉定糖被酮基取代为特征，多数酮内酯药物还含有烷芳基侧链及一个11，12-氨基甲酸。与结构改造前的大环内酯类药物相比，酮内酯药物与核糖体之间具有更强的结合力（20，21）。最近解析了酮内酯药物——ABT-773与D. radiodurans核糖体复合体的结晶，结果未能获得酮内酯亲和力提高的分子线索。红霉素及其它十四元环药物的内酯环上11，12位的羟基能与23S rRNA 的U2609形成氢键。在ABT-773（及其它酮内酯药物）结构上由氨基甲酸取代了羟基，在D. radiodurans 50S 亚单位中也与能与U2609形成氢键。生化证据表明这种相互作用对酮内酯比对红霉素及其它十四元环药物更重要，因为U2609→C可造成细菌对酮内酯耐药而对其它药物无影响（19）。但是，这种突变的重要意义未能在晶体结构上获得证据。生化和遗传学证据表明各种大环内酯类药物包括红霉素、酮内酯和泰乐菌素与23S rRNA Ⅱ域内的35螺旋（helix 35）还存在相互作用（10，14）。细菌23S rRNA 的35螺旋发生突变或转录后修饰可引起大环内酯低水平耐药（14，22）。晶体结构显示十六元环泰乐菌素的粘多糖（mucinose）侧链完全可到达35螺旋并与之结合（19），但却没有发现十四元环红霉素、ABT-773和阿齐霉素与35螺旋的相互作用（18）。目前，除酮内酯11，12-氨基甲酸与23S rRNA 的U2609存在相互作用外，在晶体衍射研究中还未发现酮内酯侧链与核糖体之间存在其它相互作用，因此，酮内酯11，12-氨基甲酸与U2609之间的相互作用可能是该类药物与23S rRNA结合力进一步增强的主要因素。 大环内酯药物分子通过其功能基团与核糖体的23S rRNA之间形成的疏水作用和氢键作用（一些十六元环药物还存在共价键作用）限制在作用靶位，这些与rRNA的相互作用占据了 药物分子大部分的结合自由能。此外，一些大环内酯类药物还能与核蛋白的L4和/或L22域相互作用。如泰乐菌素的粘多糖侧链与L22相互作用，螺旋霉素的糖胺（furosamine）残基与L4相互作用（19）。核蛋白与大环内酯分子之间的相互作用可解释为什么核蛋白L22和L4域的编码基因突变可引起大环内酯类药物耐药（23-26）。 大环内酯类药物抗菌作用的分子机制 大环内酯类药物对蛋白质合成抑制的详细分子机制取决于药物特定的化学结构。因为药物分子结构影响其与核糖体的相互作用及抑制作用方式。大环内酯类药物对蛋白质合成抑制可归纳为四种方式：1）在翻译早期抑制新生肽