天然药物提取分离技术实验指导.doc

金华职业技术学院实验教学大纲 一、课程名称：天然药物提取分离技术 课程性质：必修课，面向专业：生物制药，课程总学时：16学时 二、实验的地位、作用和目的 天然药物提取分离技术实验教学是天然药物提取分离技术课程的重要组成部分是使学生进一步理论联系实际掌握有效成分提取分离和定的基本操作技能，提高学生分析和解决问题能力养成严密科学态度和良好工作作风必不可少的教学环节天然药物提取分离技术实验 ??? 本实验以学生的预习报告、原始记录、实验操作、科学作风及实验报告做为考核标准。 七、基本设备与器材配置 烘箱，磁力搅拌，电热套，电炉，紫外分析仪，旋转蒸发仪，真空泵，红外干燥箱，电子秤，冰柜 八、实验项目及内容提要 1．槐花米中芦丁的提取分离与鉴定 a.预试； b.苷的碱提取、酸沉淀； c. 产品的精制； d苷的水解；e.苷、苷元的定性鉴定；f. 糖的纸层析鉴定准备；g.苷的乙酰化物的制备及熔点测定；h.苷、苷元的TLC鉴定；i. 糖的纸层析鉴定 2.大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定 a.预试； b.氯仿浸提； c. 产品的精制； d蒽醌类化合物的定性鉴定；e.蒽醌化合物的TLC鉴定；h. 蒽醌纸层析鉴定 3．汉防己生物碱的提取分离与鉴定 a.预试；b.酸提取、碱沉淀；c.洗、烘砂80克；d.抽滤提取物，拌砂后烘干；e.铺板；f.萃取亲酯性叔胺总碱，重结晶；g.生物碱的TLC鉴定 实验一 槐米中芦丁的提取及鉴定 一、概述 芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁具有维生素P样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。 二、实验目的和要求 1、实验目的 ① 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 ② 通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 ③ 了解UV及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 2、要求： 要拿到芦丁化合物。 三、实验方法： （1）芦丁的提取与分离（见下图） 芦丁的提取与分离流程图 （2）芦丁的鉴定 ① 芦丁的定性反应 取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使其溶解，分成三份作下述试验： A. 取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，在酌加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。 B. 取上述溶液1~2ml，然后滴加2%柠檬酸的甲醇溶液，注意观察颜色变化情况，在继续向试管中加入2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记录颜色变化情况。 C. 取上述溶液1~2ml，然后再加入10%α-等体积的萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化。 ② 芦丁水解后糖与苷元的鉴定 A. 水解方法：精密称取芦丁1g（±0.01g），加1%硫酸100ml，加热40min，放冷静置，过滤。所得沉淀用少许水洗除酸，干燥称重，计算苷元与糖的重量比。然后用乙醇（95%大约10ml）进行重结晶，即得苷元。 B. 苷元的鉴定：用纸色谱法与对照品对照。 四、实验指导 1．本实验讲解要点及注意事项 ① 芦丁提取方法，重点介绍碱-酸法的原理及注意事项。 ② 定性实验的目的、意义及注意事项。 2．实验报告要求 ① 碱-酸法提取芦丁的原理 ② 定性反应的反应机理 ③ 详细记录定性反应结果 ④ 绘制色谱结果模拟图，并计算Rf值 3．思考题 ① 苷类结构的检识大体程序如何？ ② 苷类水解有几种催化方法？ ③ 怎样确定芦丁结构中糖基是连接在槲皮素3-O-上？ ④ 怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖基一个鼠李糖？ ⑤ 苷元的结构是怎样确定的？ ⑥ 怎样确定苷键的构型？ ⑦ 芦丁的全乙酰化物的制备与苷元乙酰化物（槲皮素）的制备有何不同？为什么？ 试验二 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定 一、概述 大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。 自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载