应用微生物技术要点总结及概况.docVIP

绪论 1.微生物与石油增产 微生物采油方法分为以下两大类： （1）是利用微生物分解石油烃，产生表面活性剂、气体等代谢产物，来提高注入水的驱油性能。 （2）是借助于向地层中添加糖蜜、工业废弃物等营养物质，使微生物生长，产生驱油剂。? 2.传统微生物发酵与发酵工程的区别 传统的微生物发酵 发酵工程 1．间歇发酵 1．连续或半连续发酵 2．悬浮细胞 2．固定化细胞 3．较低温度　 3．较高温度 4．天然菌株或诱变株 4．基因工程或细胞融合株 5．间接测定产物 5．利用传感器直接测定 6．简单控制　 6．计算机控制 微生物发酵的一般过程 1.古菌 1977年，woese发现古核生物---古菌 古菌（Archea）分布：产甲烷菌；盐细菌；嗜热、嗜酸、嗜碱菌。古生菌在进化谱系上与真细菌及真核生物相互并列，且与后者关系更近，而其细胞构造却与真细菌较为接近。 研究表明：A.古生细菌在大小、结构等方面与细菌相似；B.但其遗传信息更类似于真核生物。 古生细菌是细菌的形式，真核生物的内涵。 古菌是最古老的生命体，常被发现生活于各种极端自然环境下，如大洋底部的高压热溢口、热泉、盐碱湖等。古菌多数为严格厌氧、兼性厌氧，还有专性好氧。按照古菌的生活习性和生理特性，古菌可分为三大类型：产甲烷菌、嗜热嗜酸菌、极端嗜盐菌。 研究表明：1.古生细菌在大小、结构等方面与细菌相似；2.但其遗传信息更类似于真核生物。古生细菌是细菌的形式，真核生物的内涵。 2.三域学说 1977年，Woese和Fox用比较16SrRNA的方法将生物分为3大类群（Domains）。 细胞形式的生命：细菌域、古菌域( 也称为：古生细菌、后生细菌)、真核生物域 20世纪70年代末由于美国伊利诺斯大学的C.R.Woese（伍斯）等人对大量微生物和其他生物进行16s和18srRNA的寡核苷酸测序，并比较其同源性水平后，提出了一个与以往各种界级分类不同的新系统，称为三域学说，“域”是一个比界更高的界级分类单元，过去曾称原界。三个域指的是细菌域（以前称“真细菌域”）、古生菌域（以前称古细菌域）、和真核生物域。 3.16SrDNA；GC%；DNA-DNA （1）目前常用的是建立在PCR技术基础上的16SrDNA基因的直接测序法，方便快捷。 特点：A.域间的16SRNA的相似性低于60%； B.域内的16SRNA的相似性高于70%； C.其它的序列保守的生命大分子用于进化研究---RNA聚合酶的亚基、ATP酶等同样支持三域学说； D.甲烷细菌的全基因序列分析也表明古细菌是一种新的生命形式。 （2）G+C%的比较主要用于分类鉴定中的否定。 每一种生物都有一定的碱基组成，亲缘关系近的生物，它们应该具有相似的G+C%，若不同生物之间G+C%差别大表明它们关系远。 二个形态及生化特性方面相似的菌株，如果其G+C含量的差别大于5%，则肯定不是同一个种，大于15%则肯定不是同一个属。 （3）核酸的分子杂交（DNA-DNA杂交）：不同生物DNA碱基排列顺序差异越小，它们之间的亲缘关系就越近。 4.基因组改组技术及其操作过程 Genome Shuffling（基因组改组）技术，它把传统微生物诱变育种技术与细胞融合技术结合。 其具体操作过程： ①通过对出发菌株进行诱变，制备原生质体； ②然后在模拟DNA重组的条件下对原生质体进行递推式多次融合（recursive protoplast）； ③最后筛选出具有多重正向进化标记的目标菌株。 5.固体培养生产纤维素酶 固体培养 亦称麸皮发酵法，以麸皮，米糠为基础，加其它辅料加水而成。 一种纤维素酶固体发酵大规模生产方法，选择绿色木霉工程菌株，经菌种斜面试管、摇瓶扩大培养，发酵罐再扩大直至所需液体种子量，固体发酵，通过无菌通道送至无菌接种室，然后铺设在塑料盘中接种培养基，培养72小时，制取原酶，发酵后的物料浸提，浸提后榨干，榨出液浓缩，加苯甲酸钠制成液体酶，将液体酶的榨出液超滤浓缩，加入白色硫酸铵，干燥制成粉状工业酶。 6.连续培养的优缺点 指以一定的速度向发酵液中添加新鲜培养基的同时，又以相同的速度流出培养液，从而使发酵罐内的培养液量恒定不变，使培养在近似恒定的状态下生长的培养方法。 优点：（1）减少分批发酵中的清洗、投料、灭菌等辅助时间，缩短发酵周期。 （2）生产过程便于自动化控制，产品质量稳定。 （3）采用管道化和自动化生产，明显降低劳动强度。 缺点：（1）菌种易于退化。 （2）其次是易遭杂菌污染。 （3）在连续培养中，营养物的利用率低。 三．发酵设备 1.发酵罐的基本构造及各部分功能 (1)罐体:一般内衬不锈钢,耐压在3个大气压以上。 (2)搅拌器和挡板： 搅拌器可使气液混合，大气泡击碎成碎小气泡，增 加有效接触表积，使得菌体迅速吸收氧气。