方法一多糖提取与测定.docxVIP

多糖提取与测定方法一一、多糖含量的测定（标准曲线的建立）采用苯酚-硫酸法测定植物多糖含量，标准曲线的建立：分别取0、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL及1.8mL浓度为100ug/ml的标准葡萄糖溶液，各加蒸馏水至2.0mL，再加入6%苯酚1.0mL，浓硫酸5.0mL，静置10min，摇匀，室温放置20min，然后在490nm处测光密度值A，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得到多糖测定标准曲线，计算得回归方程。植物多糖含量的计算：根据所测样品提取液的光密度值A，利用线性回归方程，计算得到多糖的含量。二、浸膏率的测定把水煎煮液过滤后的葛根滤渣置于烘箱中，在50℃条件下烘烤甘草残渣3h，冷却30min，迅速精密称定重量，再在上述温度下干燥1h，冷却、称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止，根据减失的重量，计算甘草的浸膏率。浸膏率的计算公式为：三、多糖提取流程方法一：植物组织切成小块→匀浆→热水浸提→过滤→上清液蒸发浓缩→加无水乙醇沉淀，静置48h→抽滤→沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮各淋洗2次→60℃真空干燥→得粗多糖方法二：称取干燥至恒重的葛根85.0g先经80%乙醇回流提取2次，第一次提取2h，第二次提取3h，除去单糖和低聚糖；抽滤，药渣经真空干燥后用石油醚（60-90℃）回流脱脂提取2次，第一次提取2h，第二次提取3h，抽滤，药渣经真空干燥后，加蒸馏水回流，微博处理，抽滤，去上清液，浓缩记得葛根多糖。方法三：称取干燥葛根4.0g，加400ml去离子水，85℃水浴回流提取2h，抽滤，将滤液定溶于500ml。测定总多糖含量。单因素考察实验分别考察料液比、提取温度、提取时间、乙醇沉淀浓度和提取次数对植物多糖总糖含量的影响。多糖的含量=植物多糖的含量/植物原料的重量x100%。(1)料液比对多糖总糖含量的影响称取干燥恒重药材10.00g，以不同料液比1:10、1:15、1:20、1:25、1:30(8-12倍)，在90℃的水浴下提取2h，用80%乙醇进行沉淀。名称试验一试验二试验三平行试验123123123药材质量提取温度提取时间提取次数料液比总糖含量提取率(2)提取时间对多糖总糖含量的影响称取干燥恒重药材10.00g，采用较适合的料液比、在90℃的水浴下，分别用0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h进行提取，用80%乙醇进行沉淀。名称试验一试验二试验三平行试验123123123药材质量提取温度提取时间提取次数料液比总糖含量提取率(3)提取温度对多糖总糖含量的影响用较适合的料液比、提取时间，分别在50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃水浴下提取，用80%乙醇进行沉淀。名称试验一试验二试验三平行试验123123123药材质量提取温度提取时间提取次数料液比总糖含量提取率(4)提取次数对多糖总糖含量的影响用较适合的料液比、提取温度、提取时间、分别提取1、2、3次。名称试验一试验二试验三平行试验123123123药材质量提取温度提取时间提取次数料液比总糖含量提取率(5)乙醇浓度对多糖总糖含量的影响分别以65%、70%、75%、80%、85%、90%乙醇、无水乙醇进行沉淀。名称试验一试验二试验三平行试验123123123药材质量提取温度提取时间提取次数料液比乙醇浓度总糖含量提取率稳定性影响试验：加测：颗粒剂冲泡为液体时，测定不同温度、不同时间、不同PH值下各有效成分的（稳定性）含量、澄明度、相对密度、ph值变化等。加速试验水及光照条件对【】稳定性的影响名称试验一试验二试验三平行试验123123123条件光照避光冷藏光照避光冷藏光照避光冷藏序号时长含量Ph值为7.0时，不同加热温度（水浴）对【】稳定性的影响40℃50℃60℃70℃80℃90℃12312312312312312330min60min含量90℃下，不同PH值（5-8）对【】稳定性的影响Ph值5.05.56.06.57.07.58.08.59.0含量Ph值6.06.16.26.36.46.56.66.76.86.9含量Ph值7.07.17.27.37.47.57.67.77.87.9含量Ph值8.08.18.28.38.48.58.68.78.88.9含量温度与时间对PH值（澄明度、相对密度、ph值）的影响