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水中细菌菌落总数和大肠菌群的测定 摘要： 水是微生物广泛分布的天然环境。各种天然水中常含有一定数量的微生物。水中微生物的主要来源有：水中的水生性微生物(如光合藻类)、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。水中的病原菌主要来源于人和动物的传染性排泄物。水中细菌菌落总数可作为判断被检水样被有机物污染程度的指标。细菌数量越多，则水中有机质含量越高。本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中的细菌种类繁多，它们对营养和其它生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖。因此采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基培养出的细菌总数仅是一种近似值。 水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。本实验采用多管发酵法，它是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖、产酸产气以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过初步发酵实验，平板分离和复发酵实验三个部分来测定漓江水中的总大肠菌群数量，试验结果以最可能数（most? probable? number），简称MPN表示。 关键词：细菌、菌落、大肠菌群 前言：水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数中不得超过3个/L，细菌总数不得超过100个/L。细菌总数是指1mL或1g检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计算的是平板上形成的菌落(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(mL)。它反映的是检样中活菌的数量。 大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。通过这两个实验的好处有：了解和学习水中细菌菌落总数和大肠菌群的检验原理、检验方法、数据处理和报告方法； 学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法；学习和掌握测定水中大肠菌群的多管发酵法；了解大肠菌群数量与水质状况的关系,以及它在饮水中的重要性。 1.材料和方法 1材料 1.1.1 细菌菌落总数的测定 1.1.1.1 培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，灭菌水 1.1.1.1.1成分 肉膏3.0g,蛋白胨10.0g,食盐5.0g,自来水(或蒸馏水)1000ml 1.1.1.1.2制法 将牛肉膏3.0g,蛋白胨10.0g,食盐5.0g,加热溶解于1000ml自来水中混合配制,调整pH至7.2-7.4,加入1.5%-2.0%的琼脂即得固体培养基。. 1.1.1.2仪器 灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿（6个），灭菌吸管，灭菌试管，恒温培养箱，手提式高压蒸气灭菌锅，灭菌采样瓶 1.1.2大肠菌群的测定（多管发酵法） 1.1.2.1培养基 1.1.2.1.1乳糖蛋白胨培养液 1.1.2.1.1.1成分 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 乳糖 5g 氯化钠 5g 溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L) 1ml 蒸馏水 1000ml 1.1.2.1.1.2制法 将蛋白胨、牛肉膏、乳糖和及氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节溶液pH为7.2—7.4，再加入1mL溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L)，充分混匀，分装于装有导管的试管中，于115℃高压灭菌器中灭菌20min。贮存于冷暗处备用。 1.1.2.1.2 三倍浓缩乳糖蛋白陈培养液 按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。除蒸馏水外，各组分用量增加至三倍。 1.1.2.1.3 伊红美蓝培养基 1.1.2.1.3.1成分 蛋白胨 10g 蒸馏水 1000ml 乳糖 3g 伊红水溶液（20g/L） 20ml 磷酸氢二钾 5g 美蓝水溶液（5g/L） 13ml 琼脂 5g 1.1.2.1.3.2制法 1.1.2.1.3.2.1 贮备培养基的制备 将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解与蒸馏水中，调整pH为7.2。加入乳糖，混匀后分装，以115℃高压灭菌20min。临用时加入乳糖并熔化琼脂，冷至50-55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。 1.1.2.1.3.2.2 平皿培养基的制备 将上述制备的贮备培养基融化。根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例分别吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液（0.4g伊红溶于20mL水中）和一定量已灭菌的0.5%美蓝水溶液（0.065g美蓝溶于13mL水中），加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此培养基适量倾入已灭菌的空平皿内，待冷却凝固后，置于