专题八 生物技术实践 第2讲 酶及应用和生物技术在其他方面及应用.pptVIP

与使用蒸馏水相比，使用缓冲液的优点是___________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________。 (2)蛋白质粗分离阶段透析的目的是________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________。 (3)电泳利用了待分离样品中各种分子的_______________________________________________________________ ________________等的差异，而产生不同迁移速度，实现各种分子的分离。 (4)实验小组以3%过氧化氢溶液和获得的过氧化氢酶为材料进行温度对酶催化活性影响的探究，得到右图所示的结果，根据实验结果得出“过氧化氢酶能耐受100 ℃高温”的结论，请问这一结论是否可靠？为什么？ ________________________________________________________________。 Ⅱ.多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。请回答下列有关PCR技术的基本原理及应用问题。 (1)DNA的两条链是反向平行的，通常将________的末端称为5′端，当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的________________开始延伸DNA链。 (2)PCR利用了DNA的热变性原理解决了打开DNA双链的问题，但又导致了DNA聚合酶失活的新问题。到20世纪80年代，科学家从一种Taq细菌中分离到________________________________________________________________________， 它的发现和应用解决了上述问题；要将Taq细菌从其他普通的微生物中分离出来，所用的培养基叫________________。 (3)PCR的每次循环可以分为________________三步。假设在PCR反应中，只有一个DNA片段作为模板，请计算在5次循环后，反应物中大约有________个这样的DNA片段。 (4)请用简图表示出一个DNA片段PCR反应中第二轮的产物。 (5)简述PCR技术的主要应用。 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ (要求3项以上)。 审题关键　“过氧化氢酶”、“缓冲液”、“透析”、“PCR”、“反向平行”、“DNA片段”。 命题来源　蛋白质的提取与分离、PCR技术。 思路分析　Ⅰ.(1)酶的活性受酸碱度、温度等条件的影响。使用缓冲溶液达到细胞因吸水而涨破的目的，又不会因溶液酸碱度不适宜而影响酶的活性。(2)透析是去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离。(3)电泳技术就是在电场的作用下，利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。(4)在该实验中温度应是实验变量，所以为了确保实验结果的可靠性，应该排除其他能导致过氧化氢分解的因素。Ⅱ.(1)DNA聚合酶工作时必须要有一个引物，它只能把新的核苷酸加到已经存在的核酸的3′-羟基上，与DNA母链结合的RNA引物就提供这个羟基。(2)因PCR利用了DNA的热变性原理解决了打开DNA双链的问题，所以用于催化DNA复制过程的DNA聚合酶要具有耐高温的特性。用选择培养基可将Taq细菌从其他普通的微生物中分离出来。(3)DNA复制的两条链均作为模板，进行半保留复制，所以复制5次后得到的子代DNA分子数为25＝32个。(4)新合成的DNA链带有引物，而最初的模板DNA的两条链不带有引物。(5)PCR技术可以对DNA分子进行扩增，所以可用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和DNA序列测定等方面。 ■ ■ ■ 答案　Ⅰ.(1)渗透原理(当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时，细胞吸水涨破)　可以保证酶溶液pH基本稳定，避免因pH变化影响过氧化氢酶活性 (2)除去小分子化合物(杂质)