冰冻切片及实用技术及相关临床应用.pptVIP

冰冻切片的实用技术 内蒙古林业总医院 病理科 娄全博 冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法等。这些方法，随着时代的变迁，科技的发展，许多年前被认为是非常重要的技术，现在也逐步被淘汰了。当然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受到青睐。 冰冻切片的制备及注意事项 取材 新鲜手术标本忌浸入酒精、甲醛中, 以防组织脱水, 尤其注意在取材过程中器械干燥, 不沾水, 组织不能冲洗, 以防细胞变形。组织块大小合适, 长径 0. 2cm的不宜做冰冻切片, 取材要避免脂肪组织和坏死组织, 取材的厚度在0. 5cm左右[1]。组织送检取材时，如遇含水量高的标本时，应尽量用干纱布吸干水分后再行冷冻，避免由于冰晶形成出现诊断上的失误。 温度 冰冻切片机昼夜24h处于预冷的- 4℃左右, 做快速切片时将温度降到组织块所需温度。不同组织对温度要求不同, 温度过低, 组织变脆、易碎, 温度过高则组织过软, 不能切片[1]。 切片 使用前将刀架与组织块的角度调整好, 调整好后不需要经常变换角度, 保持刀口锋利。切片机内要保持清洁, 切片时用力均匀, 厚度约4μm～5μm, 特殊要求时, 可达到3μm, 切好的组织在干净的玻片上粘附后立即放入提前配制好的冰冻切片固定液中及时固定1min～2min[2]。 染色和封片 切片后做快速HE染色, 苏木素染色过程需加热进行。这样做出来的快速切片镜下观结构完整、平坦、无皱折, 细胞核与细胞质染色色泽鲜艳, 对比清晰, 细胞无肿胀, 无收缩, 近似常规石蜡切片[3]。 冰冻切片的优缺点 优点： 1．简便，快速，用时短。可以不需要对组织固定、脱水、包埋等手续即可进行切片，减少了一些中间环节。 2．组织变化不大 3．能很好保存脂肪，类脂等成分。 4．能够比较完好地保存各种抗原活性及酶类，特别是对于那些对有机溶剂或热的温度耐受能力较差的细胞膜表面抗原和水解酶保存较好。 缺点 ： 1．不容易做连续切片。 2．切取的组织不能过大，组织过大不容易冻结或者组织冻结不均，影响切片及染色效果。 3．不容易制作较薄的切片。 4．组织块在冻结过程中容易产生水的结晶而影响细胞的形态结构及抗原物质的定位，并且组织结构也不如石蜡切片清晰。 冰冻切片的应用 （1）在手术进行中，突然发现病人的病变与原诊断，原定手术方案不相符合，或者怀疑时，需要病理确定。 　　 （2）了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞，或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。 　　 （3）对于已确定为恶性肿瘤的患者，则需要了解其手术范围是否足够，上下切缘是否有残存的肿瘤组织。 　　 （4）在做剖腹探查时所发现的肿块或者异样的组织。 　　 （5）显示组织中的脂肪和脂类物质，这常见于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研等。 　　 （6）某些酶的显示如ATP酶，琥珀酸脱氢酶等。 　　 （7）神经病理学技术中的某些染色法如：Eager氏法，Marchi氏法，Cajal氏法，Hortega氏法和Holzer氏法等。 　　 （8）对某些物质所进行的免疫荧光的研究。 [1] 洪玉萍.介绍一种快速冰冻切片方法[J]. 临床与实验病理学杂志,1999,15(5):351. [2] 骆新兰.冰冻切片常见问题探讨[ J ].临床与实验病理学杂志,1999,15(4):273. [3] 田玉旺,丁华野．一种减少冷冻切片组织内冰晶的处理方法[J].临床与实验病理学杂志,2002,18(5):568. * -20～-21 皮肤 -19～-20 胃、肠、肺 -21～-22 子宫、乳腺、卵巢 -16～-17 甲状腺、淋巴结、肝、肾 温度（℃） 组织类型 冰冻切片手术组织的事宜温度 20ml 冰乙酸 60ml 福尔马林 380ml 95%乙醇 快速冰冻固定液配方 快速HE染色 ⑦ 碳酸锂碱水 步骤 试剂 时间 ① 切片固定并微波加热 90s ② 水洗 5s ③ 苏木素 60s ④ 水洗 5s ⑤ 1%盐酸酒精 1s ⑥ 水洗 5s ? 透明、封固 1s ⑧ 水洗 5s ⑨ 伊红 5s ⑩ 水洗 5s ? 95%酒精 5s *