真菌多糖及生理活性、研究技术.pptVIP

桑黄子实体多糖的分离纯化工艺及生物活性研究 报告人：程伟 主要内容 真菌多糖概述 桑黄多糖概述 桑黄子实体多糖的提取 桑黄子实体多糖的纯化 桑黄多糖的结构分析与活性研究 应用前景 继基因组学、蛋白质组学之后，糖类研究成为21世纪巨大的科学前沿。药物糖与功能糖、用糖进行能源/资源开发等正成为我国经济的增长点。 糖工程共性关键技术主要围绕糖制备技术，以及糖分离、分析和功能评价技术展开。包含各种各样天然多糖制备、多糖降解与分离、寡糖化学-酶合成、糖化学-酶法转化等技术。 2001年Science（Vol.291）43篇论文涉及糖的研究。2007年Nature（Vol.26）7篇论文综述糖化学糖生物学研究进展。发达国家在糖研究上不惜斥巨资建立各种平台，展开糖生物学、化学糖生物学、糖组学、糖芯片、糖工程、糖药物等领域的研发。 真菌多糖： 1、一类天然高分子化合物，它广泛存在于真菌的细胞壁中，是由醛基和酮基通过糖苷键连接起来的高分子聚合物。 2、有螺旋状的三维立体结构，其构型近似于DNA，是一种β型的多糖。 3、是控制细胞分裂分化，调节细胞生长衰老的一类活性多糖。 4、其进入体内后不会被消化、分解、吸收，能够和细胞膜上的受体结合，从而能发生药理活性。因此，是一类具有广泛药理活性的功效十分显著的活性物质。 真菌多糖分类：一般分为胞外多糖和胞内多糖； 高等真菌多糖主要是胞内多糖，它主要存在于菌丝体的细胞壁或细胞间质中，通过普通粉碎不能提高其含量的是胞外多糖，反之则是胞内多糖。 真菌多糖主要分布于真菌的菌丝、子实体及其发酵液中。在不同的部位含量有所不同，在真菌的菌丝体的细胞壁和细胞质中存在较多，其他地方较少。故真菌多糖主要是在菌丝体细胞壁和细胞质中提取。 真菌多糖具有降血压、血脂、健胃保肝、抗氧化、延缓衰老、抗感染、抗辐射、促进核酸和蛋白质的生物合成，修复损伤的组织细胞等多种功效。 真菌多糖的抗肿瘤作用是目前所知其最为重要的生物活性，也是研究最为活跃的部分。 桑黄多糖的概述 近年来，真菌多糖及其复合物的研究引起越来越多的关注。 桑黄，是目前发现的生物抗癌领域公认的抗癌效率较高的一种大型药用真菌。 桑黄多糖是从桑黄子实体、菌丝体、发酵液中分离出的，具有多种生物活性，是一类真菌多糖，现已被开发成多种药物和功能性食品添加剂。 桑黄多糖的提取 桑黄多糖存在于桑黄的菌丝体和子实体中，桑黄菌丝在液体发酵时，有的将多糖分泌到胞外，形成胞外多糖；有的只留在胞内，形成胞内多糖。 若直接食用桑黄不易达到保健治疗作用，只有将其有效成分提取和纯化，才能提高功效。 桑黄多糖多以氢键、盐键等与其它物质聚合在一起，因而须以各种有效方法破坏多糖链与其它物质的共价结合，方能达到提取多糖的目的。 目前，提取多糖常用的方法有不同温度下的水提法、稀酸提法和冷热稀碱提法。其中水提法被采用得较多，适合于提取水溶性多糖；稀酸提取法适用于提取酸溶性多糖，提取时间宜短、温度不超过50 ℃，以防止糖苷键断裂；稀碱法适合于提取碱溶性糖。 大部分多糖在有机溶剂中的溶解度极小，所以可用有机溶剂来沉淀。常用4-5倍的低级醇和丙酮，一般在pH 值为7.0左右沉淀，制得粗多糖。由于水提时间长且效率低，酸碱提取易破坏多糖的立体结构及活性，而采用酶法提取真菌多糖（用复合酶与热水浸提相结合的方法），具有条件温和、杂质易除及提取率高等优点。 超声技术提取 超声波作为一种提取技术已有报道，它具有时间短、效率高、提取量高等特点，同时可防止提取物在长时间、高温条件下发生降解、褪色等变化。 超声波协同纤维素酶提取多糖的方法，通过空化、振荡等作用，使酶分子构象及催化部位微环境发生变化，从而影响纤维素酶的催化活力。此外，低强度超声不仅可使细胞周围形成微流，还可使动植物细胞产生胞内环流，从而提高了细胞膜和细胞壁的通透性，利用这一特点可达到加快细胞壁释放多糖的速度、缩短提取时间、提高多糖提取率的目的。 微波法提取 微波技术是近几年来用于天然植物有效成分提取的一项新技术，它具有快速、高效、安全、有效成分得率高、节能等特点。 据报道有人采用微波技术应用于板蓝根多糖的提取，结果表明，粗多糖得率和多糖质量分数均明显高于单独使用水煎煮法。 多糖的纯化是将粗多糖混合物分离为单一的纯多糖的过程。 在多糖提取物中，常会有无机盐、蛋白质、色素及小分子物质等杂质，必须分别除去．一般是先脱除非多糖组分，再对多糖组分进行分级。 纯化方法 （1）按溶解性不同分离：分步沉淀法、盐析法 （2）按电离性质不同分离：季胺盐沉淀法 （3）柱层析法：凝胶柱层析法、纤维素阴离子交换剂柱层析法、活性炭柱层析法、离子交换柱层析和普通凝胶柱层析联用法、三种层析柱联用。 蛋白质一般常用醇析法和Sevag法、三氟二氯乙烷法等除去； 色素大多呈负性离子，不能