第七章 DNA及生物合成(复制).pptVIP

?一、 DNA生物合成概况 生物体内DNA的合成包括三个方面: 1.以DNA作为模板指导的DNA合成称为复制，即将DNA携带的信息传至子代DNA。 2.DNA合成也可以RNA为模扳指导合成，通常将其称作反转录作用,见于RNA病毒。 3.当各种因素引起DNA损伤时，损伤DNA可进行修复合成，校正错误，完成正确合成，以保持DNA结构的稳定性和遗传信息的准确性。 ?二、遗传的中心法则 DNA通过复制将遗传信息由亲代传递给子代；通过转录和翻译，将遗传信息传递给蛋白质分子，从而决定生物的表现型。DNA的复制、转录和翻译过程就构成了遗传学的中心法则。 在RNA病毒中，其遗传信息贮存在RNA分子中。因此，在这些生物体中，遗传信息的流向是RNA通过复制，将遗传信息由亲代传递给子代，通过反转录将遗传信息传递给DNA，再由DNA通过转录和翻译传递给蛋白质，这种遗传信息的流向就称为反中心法则。 第一节DNA的复制 一、DNA复制的特征及其意义 （一）DNA复制的特征 1.半保留复制 复制：以亲代DNA为模板合成子代DNA，将 遗传信息准确地复制到子代DNA分子上，这一过程叫复制。 复制方式：半保留复制 以亲代DNA双链为模板以碱基互补方式合成子代DNA，这样新形成的子代DNA中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式叫半保留复制。 复制时，首先是DNA两条链间氢键断裂，双链彼此分开成两条单链，称为亲链。它们各自作为模板，以三磷酸脱氧核苷为原料，按碱基互补规律，合成一条与亲链完全互补的新链，称子链。子链与亲链重新形成双螺旋结构。 半保留复制的实验证据: 1958年Meselson和Stahl用同位素15N标记大肠杆菌DNA,首先证明了DNA的半保留复制。 该实验首先将大肠杆菌在含15N的培养基中培养数代后，使其DNA中的碱基氮均转变为15N。然后将大肠杆菌移至只含14N的培养基中同步培养一代、二代、三代。分别提取DNA，作密度梯度离心，将具有不同密度的DNA分离开。 2.半不连续复制 以3’→5’方向的亲代DNA链作模板的子代链在复制时基本上是连续进行的，其子代链的聚合方向为5’→3’，这一条链被称为领头链。 以5’→3’方向的亲代DNA链为模板的子代链在复制时则是不连续的，其链的聚合方向也是5’→3’，这条链被称为随从链。 领头链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续性。 3.有固定的复制起始点 DNA在复制时，需在特定的位点起始，这是一些具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点。 4.双向复制 DNA复制时，以复制起始点为中心，向两个方向进行解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 （二）半保留复制的意义 按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA的碱基序列一致，即子代保留了亲代的全部遗传信息，体现了遗传的保守性。 遗传的保守性，是物种稳定性的分子基础，但不是绝对的。 二、催化DNA复制的重要酶类 复制是在酶催化下的核苷酸聚合过程，需要多种酶和因子的共同参与。 （一）．DNA聚合酶 DNA聚合酶又称DNA指导的DNA聚合酶（DDDP），其主要作用是 在DNA模板链的指导下，以三磷酸脱氧核苷 （dNTP即dATP、dCTP、dGTP、dTTP）为 底物，按碱基配对原则，将三磷酸脱氧核苷逐 个地加到寡聚核苷酸的3′-末端上，并催化核 苷酸之间3′，5′-磷酸二酯键的形成，从而将 dNTP沿着5′→3′方向聚合成为多核苷酸 . 1.在原核生物中，目前发现的DNA聚合酶有三种，分别命名为DNA聚合酶Ⅰ（pol Ⅰ），DNA聚合酶Ⅱ（pol Ⅱ），DNA聚合酶Ⅲ（pol Ⅲ），这三种酶都属于具有多种酶活性的多功能酶。 参与DNA复制的主要是pol Ⅲ和pol Ⅰ。 DNA-pol有三种功能：①.聚合作用：即在模板指导下，以dNTP为原料，在DNA或引物RNA的3‘-OH末端逐个加上脱氧单核苷酸，形成3’，5‘磷酸二酯键，使DNA链沿5’→3‘方向延伸。②.3’→5‘外切酶活性：即能从DNA 链3’端开始沿3‘→5’方向进行水解反应，产生5‘单核苷酸。在DNA复制时，当3’末端出现错配的碱基时，可由DNA-polⅠ识别和切除错配的碱基，保证DNA复制的正确性，因而具有校对功能。③. 5‘→3’外切酶活性，即能从DNA 链5‘端开始沿5’→3‘方向水解DNA链。因此，参与RNA引物的切除。另外，它还能跳过几个核苷酸，切除错配的核苷酸，起到修复作用。实际上，DNA-polⅠ在大肠杆菌中的主要功能不是催化DNA的复制，而是切除引物，填补冈崎片段间的空隙，以及修复DNA损伤。 DNA-pol Ⅲ催化的聚合反应具有高度连续性，可以沿模板链连续地移动，一般在加入5000个以