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米根霉胞内氨基酸的高效液相色谱测定及其代谢途径分析-分析化学
( )
第 40 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 研究报告 第 4 期
2012 年 4 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 574~578
: /
DOI 10.3724SP.J.1096.2012.11048
米根霉胞内氨基酸的高效液相色谱测定
及其代谢途径分析
1 * 1,2 1 1 1 1
史纯珍 张红漫 黄 和 李 霜 宋 萍 何四龙
( 1 , 2 , )
南京工业大学生物与制药工程学院 理学院 南京 2 10009
,
摘 要 建立了米根霉胞内代谢物提取方法定量评价体系 用 100% 甲醇作为提取剂获得对米根霉胞内能荷
。 。
物质最佳的提取效果 用 HPLC 法建立了米根霉产富马酸体系胞内 18 种氨基酸的含量测定方法 采用异硫
( ) , 。 (
氰酸苯酯 PITC 作为柱前衍生化试剂 所有氨基酸在 28 min 内洗脱完毕 以 Sepax AA 柱 250 mm ×4.6 mm,
) , , , ( ) ( /)
5 mm 为分析柱 流速 1.0 mL/min 检测波长254 nm 以0.1 mol/L 醋酸钠 pH 6.5 乙腈 93 7, 为流动相
- ∶VV
, ( /) , 。 ,
A 乙腈 水 80 20, 为流动相 B 梯度洗脱 18 种氨基酸在 1.87 45.3 mg/L 范围内线性关系良好 相关
- ∶ VV ~
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系数大于 0.991 加标回收率在 96.3% ~102.7% 之间 相对标准偏差在 1.6% ~2.9% 之间 运用本方法测定不
, ,
同发酵时间米根霉胞内氨基酸的含量 得到其在发酵过程中的变化趋势 并结合氨基酸代谢途径分析了该发
酵条件下富马酸产量偏低的原因。
; ; ;
关键词 高效液相色谱法 柱前衍生化 氨基酸 米根霉
引 言
1
, 、 、
以米根霉为代表的丝状真菌是重要的工业生产菌 目前作为
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