第六章_蛋白质及测定.ppt

蛋白质分子中含有肽键 —CO—NH— 与双缩脲结构相似。碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物，溶液紫红色的深浅与蛋白质含量在一定范围内符合朗伯一比尔定律，而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关。可用分光光度计来测其吸光度，确定含量。（560nm） 双缩脲法对白、红蛋白产生的颜色反应相近，不受温度影响。可快速测定蛋白质含量，但灵敏度低，测定范围为1～20mg蛋白质，适用于精度要求不高的蛋白质含量测定，常用于谷物蛋白质含量测定。 三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等对本反应有干扰。 3）酚类和柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油 、还原剂(二硫代苏糖醇、巯基乙醇）EDTA和脲素均会干扰反应。但质量分数或体积分数在5％时，尿素、硫酸钠、硝酸钠、三氯乙酸、乙醇、乙醚和丙酮对显色无影响，高浓度时必须作校正曲线。 应用： 紫外吸收法测蛋白质含量迅速、简便、不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。因此，已在蛋白质和酶的生化制备中广泛采用，尤其在柱层析分离纯化中，常用280nm进行紫外检测，来判断蛋白质吸附或洗脱情况。 4、不同来源蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合状况有一定差异。 2.试剂 Folin-酚试剂 试剂甲： （A）称取10g Na2CO3，2g NaOH和0.25g酒石酸钾钠，溶解后用蒸馏水定容至500mL。 （B）称取0.5g CuSO4·5H2O，溶