肝脏蛋白及提取和浓度测定.2013.pptVIP

肝脏蛋白的提取和浓度测定 医学基础实验室 1.肝脏组织的提取 原理： 　　 RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液，主要裂解成分含1% Triton X-100, 0.5% 胆氧胆酸钠（sodium deoxycholate）, 0.1% SDS，得到的蛋白样品可以用于常规的Western。 1.肝脏组织的提取 （1）组织取材：　　 　　取约100mg大鼠肝脏组织，用灭菌的剪刀将组织块尽量剪碎，放入1.5ml 灭菌的EP管中 1.肝脏组织的提取 （2）超声匀浆：　　 　　加0.5mlRIPA裂解液（含50ulPMSF）,置于冰上，用超声匀浆器进行匀浆,超声每次10秒，重复3次 1.肝脏组织的提取 （3）冰上放置：　　 　　裂解完全后，冰上放置30分钟 1.肝脏组织的提取 （4）4度离心：　　 　　放入离心机中，4℃ 12000rpm离心5min 1.肝脏组织的提取 （5）吸取上清：　　 　　取上清分装于0.2ml离心管中并置于－20℃保存，待用 2.蛋白的浓度测定 2.蛋白的浓度测定-考马斯亮蓝法 实验内容 ◆肾脏蛋白的提取 ◆蛋白的浓度测定 * * 实验目的 了解并掌握蛋白质的提取方法 了解掌握考马斯亮蓝法（Braford法）测定蛋白质含量的原理和方法 实验内容 实验目的 ◆肝脏组织蛋白的提取 ◆蛋白的浓