普通微生物学实验02--细菌革兰氏染色与霉菌形态观察.pdf

实验二实验二 微生物的染色与形态观察微生物的染色与形态观察 细菌染色原理  在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，所以常 用碱性染料进行染色用碱性染料进行染色。碱性染料并不是碱碱性染料并不是碱，和其他染料和其他染料一样是样是一种盐种盐， 电离时染料离子带正电，易与带负电荷的细菌结合而使细菌着色。例如 ，，美蓝美蓝 （（亚甲蓝亚甲蓝））实际上是氯化亚甲蓝盐实际上是氯化亚甲蓝盐 （（mmethylenebluechlorideethylenebluechloride ，，缩写缩写 为MBC ），它可被电离成正、负离子： MBC→methylene blue++chloride- 带正电荷的染料离子可使细菌细胞染成蓝色带正电荷的染料离子可使细菌细胞染成蓝色。常用的碱性染料除美常用的碱性染料除美 蓝外，还有结晶紫（crystal violet）、碱性复红（basicfu-chsin ）、番红（ 又称沙黄，safranine）等。 细菌体积小，较透明，如未经染色常不易识别，而经着色后，与背 景形成鲜明的对比，使易于在显微镜下进行观察。 革兰氏染色 1884年，丹麦医生革兰(C. Gram) 发明 的一种鉴别不同类型细菌的染色方 法。把几乎所有的细菌分为： 革兰氏阳性菌（G＋） 革兰氏革兰氏阴性菌性菌 （G－）。 结果结果: : 革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌———— 紫色紫色紫色紫色 革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌————红色红色红色红色 + - G 和G细胞壁结构比较 革兰氏染色原理 通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶 于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较 厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处 理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇醇 处理不会出现缝隙，，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在 壁内壁内，使其仍呈紫色使其仍呈紫色；而革兰氏阴性而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄菌因其细胞壁薄、外膜外膜 层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以 类脂为主的外膜迅速溶解类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结 晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再 经沙黄等红色染料复染经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色就使革兰氏阴性菌呈红色。 革兰氏染色的意义 对于实验的指导 革兰氏阳性细菌不容易进行基因操作，难以用 转化的方法导入外源转化的方法导入外源DNADNA 。进行基因组提取的时候进行基因组提取的时候 需要用溶菌酶进行细胞壁裂解。 临床意义临床意义 其重要的临床意义在于：1.鉴别细菌2.选择药 物3.与致病性有关：：革兰氏阳性菌能产生外毒素 ，，革革兰氏阴性菌能产氏阴性菌能产生内毒素内毒素，，两者的致病作用不两者的致病作用不 同。 革兰氏染色基本步骤 基本步骤： 涂片固定—— 结晶紫初染—— 碘液媒染——95% 乙醇脱 色色0.5min—— 番红复染番红复染1min 结果: 革兰氏阳性菌—— 紫色 革兰氏阴性菌——红色 革兰氏染色步骤 结晶紫初染（1~2 min） 水洗 碘液媒染碘液媒染 （（~11 miin）） 水洗 95%乙醇脱色（20~30 s至流出酒精刚刚不出现颜色） 立即立即水洗水洗 番红复染（2~3 min） 水洗 干燥干燥 注意事项 不要取过多