大豆抗病相关基因SR1正反义植物表达载体的构建及遗传转化研究.PDFVIP

第 24 卷 　第 2 期 大 　豆 　科 　学 Vol . 24 　No . 2 2005 年 　　5 月 SO YB EAN 　SCIEN CE May 　　2005 大豆抗病相关基因 SR 1 正反义植物表达载体 的构建及遗传转化研究 林世锋 　张淑珍 　杨秀红 　陈庆山　杨庆凯 　李文滨 ( 东北农业大学大豆科学研究所 ,哈尔滨 150030) 摘要 　实验构建了CaMV 35 S 启动子控制下的大豆抗病相关基因 SR 1 的正反义植物双元表达载体 pB ISR 1 ( + ) 和 pB ISR 1 ( - ) 。通过根癌农杆菌叶盘转化法 ,将正义和反义 SR 1 基因导入烟草 Ha vana 425 ,经卡那霉素筛选 ,获得了抗性植株 。经 PCR 和 PCR - Sout her n 印迹分析 ,证明抗性植株 中整和了 SR 1 基因 ,R T - PCR 分析进一步表明正义和反义基因皆能转录为完整的 m RN A ,经疫 霉根腐接种及抗病性鉴定表明 ,转反义基因株系和未转基因株系均轻微感病 ,而转正义基因株系始 终没有出现感病症状 。 关键词 　大豆 SR 1 基因;表达载体 ;转化 ;烟草 ( ) 中图分类号 　S 565 1 　　文献标识码 　A 　　文章编号 　1000 - 984 1 2005 02 - 0090 - 04 　　植物抗病基因的克隆研究对于抗病育种和抗病 质粒 p E42 (含大豆抗病相关基因 SR 1) 由本实验室 机制的理解具有重要意义 。但从现有的文献报道来 克隆和构建 ,抗性标记为 A mp r 。 看 ,大豆抗病基因的研究还很薄弱 ,迄今尚未有功能 限制性内切酶 , Klenow 大片段 , T4 DN A 连接 性大豆抗病基因被克隆的报道 。 酶 ,M - ML V 反转录酶购 自 Pro mega 公司 ,地高辛 2003 年 ,杨秀红从大豆抗疫霉根腐病品种绥农 ( 标记和检测试剂盒 D I G High Prime DN A L abe 10 号中分离出大豆 NB S 类抗病基因的同源序列 , ) ling and Det ection St art er Kit Ⅱ购 自Roche 公司 , 在此基础上 ,通过 RA CE 技术获得了 3574bp 的全 其它生化试剂购 自 Ta KaRa 公司 。所用 PCR 引物 长大豆抗病相关基因 SR 1[ 1 ] 。尽管序列和结构上的 由上海博亚生物技术有限公司合成 。 分析均已表明,SR 1 基因为大豆抗病相关基因 ,但还 ( ) 烟草 N icot i ana t abacum L . 种子