大豆转化过程中的褐化现象研究.PDFVIP

作物杂志 　Crop s 20 101 大豆转化过程中的褐化现象研究 李海燕 　刘 淼 　武小霞 　韩英鹏 　李文滨 (东北农业大学大豆生物学教育部重点实验室 , 150030 ,黑龙江哈尔滨 ) 　　摘 　要 　由大豆愈伤组织所产生的酚类物质 色或暗褐色 ,并逐渐扩散到培养基中 ,抑制细胞 内 可诱发组织产生褐化 , 并严重影响大豆离体培养 其他酶的活性 ,影响细胞的正常代谢 ,毒害整个组 时植株的转化率 。本文以东农 50 为试验材料 ,研 织 ,甚至导致组织死亡 [ 2 ] 。我们对大豆植株 的不 究了不 同外植体和不 同添加剂对抑制褐化 的作 同部位 ,褐化的影响因素 以及控制褐化的方法进 用 。结果表 明 ,子叶节和胚尖作为外植体褐化率 行了研究 ,探讨解决褐化问题的有效方法 ,为解决 较低 ; L 半胱氨酸和 A gNO3 对大豆抑制褐化效果 大豆转化过程中遇到的褐化问题奠定基础 。 明显 。 1　材料与方法 关键词 　大豆 ;褐化 ;抗氧化剂 ;抑制剂 11　大豆材料 ( ) 大豆 G ly cine m ax 是主要的食用蛋 白和工业 本研究以东农 50 为研究材料 ,该材料 由东北 原料 ,也是重要的油料作物和饲料作物 。中国是 农业大学大豆研究所提供 。 大豆的原产地和生产 、消费的主要国家 ,但大豆的 12　取材部位及时期 产量受病虫害 、干旱等不利因素的影响 ,产量不稳 分别选取大豆的子叶节 、胚尖 、下胚轴 3 种常 定 ,远不能满足人们 的需要 [ 1 ] 。通过转基 因技术 用的部位作为外植体 。 改造大豆基因型 ,对培育抗逆性的大豆新 品种具 13　不同的添加剂 有积极的作用 。但是 ,相对于其他作物如水稻 、烟 抗氧 化 剂 : L 半 胱 氨 酸 、A gNO 、抗 坏 血 酸 3 草等 ,大豆转化一直是植物基因工程领域 的难点 (V c) 、维生素 E 经高压灭菌后在共培养培养基中 之一 。尽管许多研究者致力于对大豆遗传转化方 加入抗氧化剂 。设 4 个处理 ,每次进行 4 次重复试 法的研究 ,但转化的频率很低 ,远未模式化 ,难 以 验 ,统计褐化率并进行方差分析 。 满足人们的要求 。 吸附剂 :活性炭 [ 3 ] ,方法与抗氧化剂相同。 大豆转化效率低的原因之一是大豆中含有较 多的多酚氧化酶和过氧化氢酶 ,在遇到病原体侵 2 　结果与分析 染或物理损伤时 ,氧化酚类化合物可造成外植体 2 1　不同外植体在培养过程中褐化程度的比较 伤 口的褐化和坏死 ,从而阻止农杆菌的侵染 ,大大 不同外植体之间存在不同程度的褐化 。经过 降低外源基因的转化效率 。因此 ,采取有效的防 4 次重复试验 , 子叶节 的褐化率为 25 % , 生长 良 止褐化的措施 , 是保证大豆遗传转化 的关键 。褐 好 ,褐化程度轻 ,胚尖的褐化率最低为 17 8% ,长 化是指外植体接种后在组织培养过程 中 , 由于切