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　　简论毕业论文1 简论毕业论文1导读： 舒筋活血丸中黄曲霉毒素检测 论文：陈欢 重庆医科大学2009级中药学（中药制药方向） 论文指导：许秋霞 谢静 重庆医科大学中医药学院 400016 摘要 目的：采用免疫亲和柱净化，结合柱后光化学衍生化的高效液相色谱-荧光检 测器建立检查舒筋活血丸中是否含有黄曲霉毒素及黄曲霉毒素是否超标的检查 方法。方法：舒筋活血丸样品经70%甲醇提取，、免疫亲和柱净化后，用高效液 相色谱-柱后衍生-荧光检测器检测。高效液相色谱以十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂；以甲醇-乙腈-水（13.5:13.5:73→ 20:20:60)为流动相梯度洗脱；荧光检 测器的激发波长为365nm.发射波长为440nm 。结果：黄曲霉毒素B1、B2、G1、进样量分别在0.0099～0.0594ng、0.0028908～0.017344ng、00g、0.0028059～0.0168254ng范围内线性关系良好。RSD=1.4％（n=6），回收率在76.3％～88.6％之间。结论：用本法对舒筋活血丸中有害、 有毒的黄曲霉毒素进行监测，监测效果好，操作简便，结果准确，重复性好。 关键词：舒筋活血丸 黄曲霉毒素 免疫亲和柱 高效液相色谱 柱后衍生 The aflatoxin detect of shujinhuoxueethod to determine aflatoxins and ulate limitation in ShuJingHuoXueethod : After extracted by 70% methanol and purified by immuno-Affinity column , the aflatoxins ined by fluorescence detection. 1(AFM1)是黄曲霉毒素B1的代谢产物之一，能在摄入黄曲霉毒素B1奶牛的鲜乳中检测到。黄曲霉毒素分布广，广泛污染粮食、食品、药材和饲料，花生、玉米、黄豆、棉花等作物及其副产品易感染黄曲霉，含黄曲霉毒素的量也较多，对人类健康的危害极大[2]。黄曲霉毒素具有基因毒性，可使基因发生突变，由此导致动物发生畸变、诱变及癌变，黄曲霉毒素还具有很强的肝毒性，常导致急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生等病变。黄曲霉毒素B1与其他致病因素（如肝炎病毒）等对人类疾病的诱发具有叠加效应，其半数致死量为0.36μɡ/kg体重，属于特剧毒的毒物范围[12]，其毒性比 大10倍，比砒霜大68倍，仅次于肉毒毒素，是目前已知霉菌中毒性最强的，1993年被世界卫生组织的(IARC)划定为I类致癌物。 中药及其相关产品种类繁多，药材种植地区广泛，在生产、加工、运输、贮存过程中，很容易发生霉变而污染各种真菌，产生对人体有害的真菌毒素，中药真菌毒素污染问题引起了业内人士的重视[3、4]。2001年，中华人民共和国商务部公布了《药用植物及制剂外经贸绿色行业标准》，规定黄曲霉毒素B1限量应小于等于5 μg／kg(暂定)。《中国药典～2010年版一部收录了中药中黄曲霉毒素B1 ，B2，G1 ，G2的高效液相色谱荧光检测方法，对桃仁、胖大海、陈皮等中药规定了AFB1最高限量为5μɡ 简论毕业论文1(2)导读： / kg，AF(B1+B2+G1+G2)最高限量为10 μg／kg[5]。 随着黄曲霉毒素限量检测要求的日益严格，对检测方法在灵敏度、准确度和自动化等方面提出了新的要求。本实在试液前期处理杂质时采用免疫亲和柱（基于抗原抗体反应，特异性抗体连接在柱体内，选择性吸附样品中的待检物，杂质不被吸附，流出柱外，柱上结合的目标物再被特定的洗脱液洗下来，可以用于液相色谱(HPLC)分析或者ELISA含量测定，是一种高效的前处理柱）来净化含大量成分的试液。《中国药典》2010年版收载的“中药中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定法”为通用检测法，采用HPLC-碘化学试剂柱后衍生-荧光检测器测定。本实验利用黄曲霉毒素在紫外光照射下能产生荧光的特点，改为光化学衍生，操作更方便快捷。 黄曲霉毒素B1 黄曲霉毒素B2 黄曲霉毒素G1 黄曲霉毒素G2 黄曲霉毒素M1 图1 5种真菌毒素的化学结构 1 仪器与试药 1.1 仪器 AS20500 ADT超声波清洗器 （天津奥特塞思斯仪器有限公司） 高效液相色谱仪 （美国 l,)、黄曲霉毒素B2(0.3μg/ml，)、黄曲霉毒素G1(1.0μg/ml，中检维康