斜带石斑鱼生长催乳素基因全长cDNA的克隆、表达及其免疫荧光分析.pdfVIP

高技术通讯 2004 .4 斜带石斑鱼生长催乳素基因全长cDNA 的克隆、表达及其免疫荧光分析! 贾海波! 周 莉 汪 洋 李创举 桂建芳 （中国科学院水生生物研究所武汉发育中心淡水生态与生物技术国家重点实验室 武汉430072 ） 摘 要 我们从斜带石斑鱼垂体的 质粒文库中筛选到生长催乳素基因（ SMART ODNA So- matoiaOtin， ）的全长 片段，其编码区为 ，编码 个氨基酸，其中 端的 SL ODNA 1644bp 231 N- 24 个氨基酸肽段为信号肽。运用RT-PCR 技术考察了其在石斑鱼不同组织中的mRNA 的转 录水平，结果表明，该基因在垂体中大量转录，在其他组织中几乎检测不到转录本的存在。 选取基因开放阅读框的核苷酸序列插入pGEX-KG 载体进行原核表达，在大肠杆菌中表达 的融合蛋白的分子量约为50kDa，并以表达的产物为抗原免疫家兔制备了多克隆抗体。 采用冰冻切片和 标记的荧光染色方法将 基因初步定位于脑垂体中部，沿着神经 FITC SL 组织边缘分布。本研究为深入研究石斑鱼的生长激素 催乳激素家族的进化关系及 / SL 基因的功能奠定了基础。 关键词 斜带石斑鱼，生长催乳素，生长激素/ 催乳激素家族，免疫荧光组化分析 时也是人工繁殖与育苗技术难度最大的海产鱼类之 ［ ］ 0 引 言 一 13 。尽管已进行了一些初步的繁殖生物学研究 以及运用激素诱导石斑鱼性逆转的实验，但对其生 生长催乳素（ ， ）是生长激素 长、生殖及发育的分子机制的研究报道不多。因此， SomatoiaOtin SL （ ）催乳激素（ ）家族的一种新 在本研究中我们从斜带石斑鱼垂体的 growth hormone / proiaOtin SMART ODNA 的脑垂体蛋白质激素，最早是在 世纪 年代发 质粒文库中筛选到生长催乳素基因 的全长 20 90 SL OD- 现的，是由鱼类脑垂体中部细胞产生的一种单链多 NA 片段，运用RT-PCR 技术考察了其在石斑鱼不同 肽激素。生长激素、催乳激素及生长催乳素具有相 组织的mRNA 转录水平的差异，并采用冰冻切片和 似的结构及交叉的功能，被划分为同一个多肽激素 FITC 标记的荧光染色方法对其蛋白进行初步定位， ［］ 家族，并认为是由同一个基因进化而来 1 。迄今为 为深入研究石斑鱼的生长激素 催乳激素家族的进 / 止，关于生长催乳素的结构和