细胞工程精简资料.docVIP

第一章：绪论 细胞工程(cell engineering)：根据人们的需要，在体外对生物的细胞进行生长与分化的调控、遗传重组与改良，使其生产出人类所需要的产品。 方法：遗传重组与改良、细胞融合、核质移植、细胞器移植、染色体移植、转基因。 产品：生物的组织、器官、个体；药物(抗体、多肽药物、小分子药物、色素、香精)；蛋白质(酶)等 1902年：德国植物学家Gottlieb Haberlandt在世界上首次开展了植物组织培养研究，他分离和培养了许多单子叶植物的叶肉细胞，并进行了培养。[Gottlieb Haberlandt(哈布兰特): 从事植物组织体外培养研究的第一人] 1937年： White建立了第一个组织培养的综合培养基，为White培养基(怀特培养基) [MS培养基是1962年为培养烟草而设计，MS培养基使用最广] 1952年(第一例无病毒植株)：Morel等人通过培养感染了病毒病的大丽花的分生组织(meristem)，得到了无病毒植株，栽培后所开花朵又美丽如初，恢复了观赏价值。 1958年：Reinert和Steward等成功地将胡萝卜韧皮部单细胞培养成完整的植株，证明了细胞全能性假说。 1959年：Morel在进行兰花脱毒培养时发现了兰花可以通过组织培养技术进行快速无性繁殖，并于1960年首次报道了该发现。大大促进了兰花组织培养技术的研究和应用，为国际兰花工业的形成和发展奠定了基础，相继一些有重要观赏价值的兰花实现了大规模化生产，产生了巨大的经济效益。 第二章：细胞工程实验室组成及无菌操作技术 细胞工程实验的基本需要:实验准备包括培养基配制、器皿洗涤、培养基和器皿灭菌等;无菌操作;控制培养 一 实验室组成:1.基本实验室：A、准备室：准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作，要求宽敞明亮，通风条件好(准备工作：器皿的洗涤、培养基的配制与分装、培养基和器皿的灭菌;组成：洗涤区、灭菌区、贮藏区、培养基配制区)B、无菌操作室：进行无菌操作，要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌状态；组成： 缓冲准备区（更换衣帽、拖鞋、洗手等）；接种区（培养材料的无菌操作）无菌操作室功能简单，面积应小，门窗密闭性好，以保证其长期处于较好的无菌状态C、培养室：对离体材料进行控制条件下的培养；要求是可控制光温，保持相对无菌状态：温度：25～27℃(植物)，35～37℃(动物)；光照强度：2000～3000 lx；配置适宜的培养架；对于某些精细培养类型(如细胞培养和原生质体培养等)，也可采用光照培养箱或人工气候室代替培养室2.辅助实验室; 细胞学实验室：对培养材料进行细胞学鉴定和研究；由制片室和显微观察室组成；要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染 生化分析室：在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查；大型的次生产物生产实验室，还应建立有效物质分离实验室 3.细胞工程实验室布局：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察 二 基本设备及使用 Section 1 细胞工程实验室组成 1、基本设备:⑴天平：2～3台不同精度的天平（0.001或0.0001，0.01或0.1g）⑵冰箱：用于各种维生素和激素类药品及培养基母液的保存、某些实验材料的低温处理；需1～2台，有时需用到超低温冰箱（-80℃）⑶酸度计;用于测定培养基及其它溶液的pH;一般要求可测定pH范围1-14之间，精度0.01即可⑷离心机:用于细胞、原生质体等活细胞分离(用低速离心机)；用于细胞器、核酸以及蛋白质的分离(用高速冷冻离心机)；规模化生产次生产物(选择大型离心分离系统)⑸加热器：用于培养基的配制；电炉、微波炉⑹纯水装置：离体培养应使用符合试验要求的纯水或蒸馏水；蒸馏水器；纯水机⑺分装设备：用于大型生产实验室培养基的分装 2.灭菌设备：（1）高压蒸汽灭菌锅：手提式 、立式 、卧式；⑵干热消毒柜（烘箱）；⑶过滤灭菌装置；⑷喷雾消毒器；⑸紫外灯 3. 无菌操作设备 ：⑴超净工作台（净化工作台）：通过空气过滤去除微生物和灰尘颗粒来达到净 化目的的装置；由鼓风机、滤板、操作台和照明灯等部分组成；单人式和双人式；垂直式和平流式 ；⑵接种箱 4.培养设备： 根据需要选用不同规格和控制精度的设备：培养架；培养箱；摇床（或振荡培养箱）；生物反应器 5. 光温控制设备： 照度计、时间程序控制器、空调及温度感应器 6.细胞学相关设备 ：各种显微镜；流式细胞仪 Section 2 无菌操作技术 一、试验器皿及洗涤 （一）、试验器皿 1.培养容器：玻璃容器—无色并不产生颜色折射的玻璃材质（各种规格的培养皿、三角瓶、试管、培养瓶）；塑料容器—材质轻、不易破碎、制作方便，使用广泛（一次性的和可重复使用的） 2.金属用具：细