大鼠小肠上皮细胞增殖、凋亡加龄变化及Fe-%273%2b-、Ca-%272%2b-对Cacol-2细胞凋亡影响地研究.pdfVIP

中文摘要 5 从A1组、A2组到A3组的荧光强度呈增强趋势，其中A1组的荧光强 Newman检测各组两两之间相比均差异显著(尸o．01)。提示：A23187的 这种向胞内转运Ca2+的作用是剂量依赖性的。 3．Ca2+对Caco一2细胞凋亡的影响对照组凋亡细胞数最少，凋亡百分率为 O．32％，凋亡峰较低；从A1组、A2组到A3组细胞的凋亡程度呈增加 趋势，各组细胞凋亡百分率分别为O．69％、0．90％平n1．10％。经x2检验 Test)表明Al组细胞凋亡百分率比对照组显著增多 (Chi—square (P0．01)；A2组与A1组相比，仅有上升趋势，差异不显著(P0．05)； A3组与A2组相比，差异不显著(P0．05)；但A3组与A1组相比，明 显升高(P0．01)。提示：随着胞内钙离子浓度的增加，细胞的凋亡百 分率呈上升趋势，即胞内高钙与Caco．2细胞的凋亡呈正相关。 四、Fe3+对Caco．2细胞Ca2+吸收的影响 1．低铁对Caco一2细胞Ca2+吸收的影响对照组荧光强度较弱(27．50± 13．18)。经LSD检测，实验组Bl组比对照组细胞的荧光强度显著增强 (_Po．01)；方差分析发现随着DFO浓度的增加，Fluo．3，AM的荧光强 度呈增强趋势(其中B1组的荧光强度为35．71±13．99，B2组为72．19 两相比，均差异显著(尸0．01)。提示：细胞外Fd+的减少，有利于ca2+ 向胞内转运，且作用明显。 2．高铁对Caco一2细胞ca2+吸收的影响对照组荧光强度较弱(44．43± 58．47，C3组为53．29±19．82，方差分析发现随着FAC浓度的增加， Fluo．3／AM的荧光强度呈显著减弱趋势(尸o．01)。但经LSD检测发现 Cl组与对照组相比荧光强度明显增强(尸o．01)。提示：细胞外Fe计浓 度增加幅度较小时，可诱导ca2+转运增加，但随着Fe¨浓度的不断加大， 有抑制Ca2+向胞内转运的作用，且作用明显。 中文摘要 6 五、原代培养小肠上皮细胞的形态及鉴定 1．倒置显微镜下可观察到经过消化、离心处理的小肠粘膜悬液主要由隐窝 样上皮细胞团构成；通过台盼蓝染色鉴定，经胶原酶Ⅺ型和中性蛋白酶 I型联合消化分离后细胞的存活率可达95．7％。去掉的沉淀中有未被分 散的上皮细胞和弹性纤维。 2．经原代培养的肠粘膜上皮细胞，24～48h可见贴壁；绒毛细胞团贴壁后， 上皮细胞开始移行生长；4～6d形成一群一群细胞集落；lO～12d细胞 汇合成片。细胞为多角形单层生长，呈“铺路石样(pavement—like)”， 细胞边界清楚，互不重叠，胞浆丰富，核为圆形或卵石状，核内染色质 稀疏空亮，核仁l～2个。显微镜下还可见少量平滑肌细胞、成纤维细 胞及神经胶质样细胞。当细胞生长到密度非常大时即出现接触抑制。本 实验所用细胞并未进行传代培养。 3．细胞角蛋白为上皮组织的特征性抗原成分，本实验选用生物素标记的细 胞角蛋白抗体来定性显示大鼠的IEC。免疫细胞化学结果显示IEC为阳 性(棕色)，阴性对照组不显色。 结论 1．出生大鼠空肠绒毛较小，肌层较薄，杯形细胞数量很少；3周龄时绒毛 增长较快，肌层增厚，杯形细胞数量增多；到3月龄绒毛增长至最高， 肌层又变薄，杯形细胞数量也有所下降；到12月龄时绒毛开始出现肿 胀、变短等现象，肌层又增厚，杯形细胞数量又开始增加。提示：3周 龄大鼠出现断乳取食的变化，绒毛高度的增加使吸收面积增大，肌层的 增厚促进小肠的蠕动，使食物充分混匀，杯形细胞数量增加使粘液的总 分泌量加大；3月龄大鼠绒毛最高，此时期大鼠小肠消化吸收功能最强， 但杯形细胞数量有所下降，可能是由于这一时期大鼠消化腺的分泌功能 日益加强所致；到12月龄由于粘膜细胞的坏死等作用绒毛开始出现肿 胀、变短现象，而杯形细胞数量却又显著性增加，这是大鼠进入老龄期 的一种代偿性生理变化，此种变化可对由于机体日渐衰老而出现的消化 吸收功能减弱有所补偿。可见大鼠小肠绒毛的这种增龄变化规律是与其