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丝裂原活化蛋白激酶介导纤维蛋白(原)影响 血管平滑肌细胞增殖及迁移 硕士研究生： 齐岩梅 指导教师： 韩雅玲教授 指导小组： 康建 副主任技师 闰承慧 主管技师 专业名称 内科学 前 言 类健康与生命的头号杀手，也使包括中国在内的发展中国家面临严峻挑战，然而 其发生机制至今未明确。经皮冠状动脉介入治疗(percutaneouscoronary 疗方法也日益丰富，然而其并发症——再狭窄问题至今尚未完全解决。 再狭窄被看作是As的快速发生发展过程，而血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)的迁移和增殖是两者发生发展过程中的共同细胞生 物学特征性事件。影响VSMC增殖和迁移的因素很多，流行病学和前瞻性临床试 验证实纤维蛋白原(fibrinogen，№)是As独立危险因子，动物实验和体外研究 证实动脉壁内Fg向纤维蛋白(fibrin，Fb)的转化与As进展、血栓形成及再狭 窄密切相关，但对于Fg本身是否为As的致病因子及其是否参与再狭窄过程目前 仍存在争议。本实验通过观察不同浓度的Fg／Vb对体外培养的大鼠主动脉平滑肌 aortasmoothmuscle 细胞(rat cell，RASMC)增殖和移行的影响，探讨Fg本身是 否具有直接致As作用及其与Fb作用的不同之处。 activatedkinase，MAPK)是介导细胞 丝裂原活化蛋白激酶(mitogenprotein 外信号与细胞核反应间信息传递的共同通路与中心环节，但关于MAPK信号途 径在Fg／Fb影响VSMC增殖和迁移过程中的作用目前尚未见报道。本研究进一步 探讨了MAPK 3个亚族：细胞外信号调节激酶(extracellular signal—regulated N-terminalkinase， MAPK和c-JunN末端激酶(c-June kinase，ERK)、p38 JNK)在F∥Fb诱导RASMC增殖和趋化过程中的调控作用。 【说明】本课题是导师韩雅玲教授辽宁省优秀青年基金(课题号973012)的 部分研究内容。 ·5’ 第一部分Fg／Fb对RASMC增殖和迁移的影响 材料和方法 一．主要仪器和试剂 (一)仪器 1．二氧化碳培养箱：HERAcell德国Heraeus公司 2．生物安全柜：Hfsafc1200德国Heraeus公司 3．全温振荡培养箱：HZQ．F160哈尔滨东联电子有限公司 4．热空气循环消毒箱：uT12德国Heraeus公司 5．电泳仪：Power3000美国Bio—Rad公司 pac 486 6．超低温冰箱：HFUBasic德国Heraeus公司 7．纯水器：Milli．Qbiocel法国Millipore公司 8．扳荡仪：Minishaker广州IKA公司 9．荧光倒置显微镜：Ix．70同本Olympus公司 10．激光共聚焦显微镜：FV-500日本Olympus公司 11．核酸蛋白测定仪：BioPhotometer德国Eppendorf公司 12．低温浴槽：HMT200丹麦Heto—Holten公司 Pico德国Heraeus公司 13．台式离心机：Biofuge Strators德国Heraeus公司 14．台式高速冷冻离心机：Biofuge