土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及其淀粉酶活力的测定FINAL.docVIP

土壤中产淀粉酶芽胞杆菌的筛选及其淀粉酶活力的测定设计性实验方案 课程名称：微生物学实验 学院：生命科学学院 班别：06生工 组员： 摘要：本文通过稀释平板和分区划线的方法在演艺中心旁的土壤、新运动场附近的足球场和实验室老师用于培养大麦所用的有机肥土壤培养基的土壤样品中分离到能产淀粉酶的芽孢杆菌3株，编号为3、5、7。通过观察其透明圈并测量计算透明圈直径（H）和菌落直径（D）的比值和采用3，5-二硝基水杨酸显色法（DNS）对发酵培养基发酵培养提取的粗酶液进行酶活力测定的方法对该3株菌株进行鉴定，结果表明 前言：酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂，在生物体中已发现的酶有2500多种。由于酶促反应的特异性强，反应条件温和、安全、无毒、环境污染少。而不同类型的微生物由于自身生长的需要，产生并向胞外分泌能水解大分子蛋白和淀粉的酶类，使不能透过微生物细胞的大分子物质经酶解后形成小分子糖、小队和氨基酸，可为微生物提供碳素和氮素营养。由于微生物体积小，生长速度快，易于大规模生产，从微生物中制取酶已成为发酵工业中的一个新兴领域。目前能由工业生产的50多种酶制剂，大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌产生的。酶制剂中的蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶，葡萄糖异构酶在食品、洗涤剂、皮革、纺织、造纸、诊断、药用等领域具有广泛的应用价值。潮lJ值得一提的是，用于H报反应的高温叫A聚合酶Taq酶是从古生菌中的水生栖热菌(7AowM6g坝zifm)中获取的，此酶可耐80—90℃高温，而最新的Pfu酶则是从另一类古生菌——激烈火球菌(P)州。en6／M71删)中获取的。该酶可耐90℃以上的高温，这两种微生物酶的发现，为分子生物学的研究提供了有力的工具。 一、实验目的要求 1、了解微生物分离纯化的原理及微生物分离纯化常用方法和技术； 2、掌握从土壤中筛选产淀粉酶菌株的原理及方法； 3、掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力测定的原理及方法； 4、培养学生自行设计实验流程、综合分析解决问题及判断实验结果的能力； 5、对所学习过的微生物实验方法进行综合技能训练； 6、从不同环境土壤样品中筛选出能产淀粉酶的芽孢杆菌，并分析比较各产淀粉酶菌株的产淀粉酶活力及总结各芽孢杆菌在土壤中的分布情况。 二、实验原理 土壤微生物类群在全球自然生态系统中具有不可替代的作用,它推动着生态系统的能量流动和物质循环,维持生态系统的正常运转,是生态系统中的重要组成部分,在土壤中的分布既反映土壤、植物和气候等综合因素对微生物的影响和作用,同时其生命活动也反映出土壤肥力、土壤改良与植物营养的密切关系。芽孢杆菌是土壤细菌中最具活力的部分之一,也是土壤细菌的主要种群之一[3]。 芽孢杆菌属(Bacillus)是一类好氧或兼性厌氧、产生抗逆性内生孢子的杆状细菌。多数为腐生菌,主要分布于土壤、动植物体表及水体中。由于芽孢杆菌属的细菌可以产生多种有用代谢产物,芽孢又是菌体度过不良环境的休眠体,因此,在工、农业生产上有较高的应用价值 [1]。 从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。平板分离发普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理是选择适合与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。值得指出的是，从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。 土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。本实验将用营养琼脂和淀粉牛肉膏培养基分离纯化产淀粉酶的芽孢杆菌。 三、实验材料和用具 土样采集 新运动场附近的足球场、温室旁、b17楼下、演艺中心旁的土壤和实验室老师用于培养大麦所用的有机肥土壤培养基 营养琼脂(%)：蛋白胨牛肉膏 氯化钠琼脂～2 蒸馏水 将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内加入15%氢氧化钠溶液约2mL校正pH至7.2～7.4。加入琼脂,加热煮沸使琼脂溶化。～校正pH至7.2～7.4K2HPO4 0.2 校正pH 7.2～7.47.2～7.4西蒙氏柠檬酸盐培养基氯化钠硫酸镁(MgSO4·7H2O)磷酸二氢铵磷酸氢二钾柠檬酸琼脂2溴麝香草酚蓝溶液4