制备柱选择一般指导建议.docVIP

【百家讲堂第27期】制备型色谱柱选择指南 主讲人：xw1014 —纯化—目标物,制备柱则是完成这一过程的一个工具。其固定相种类和分析柱相似，有硅胶、键合固定相（如C18/C8等）、离子交换树脂 、聚酰胺、 氧化铝、 凝胶等（对填料可以进一步处理提高了分离效果，如：对硅胶进行的硝酸银（或缓冲液）处理 ）。 其装柱方法，根据固定相颗粒度和柱子的尺寸，有不同的装柱方法，装填越好分离效果越好。如湿法装填，颗粒直径小于20－30um的固定相，柱直径在50mm以内（同分析柱装填方法相似）；还有如径向压缩或轴向压缩，柱长压缩技术，柱直径大于50mm时采用。这种方法，先将固定相悬浆（或偶尔是干填充物）装入柱中加压，利用物理方法将其压紧。如下图： 为了加快分离时间和提高分离效率，制备色谱的的进样品量将会很大，这导致制备色谱柱的分离负荷的相应加大，也就必须加大色谱柱填料，增大制备色谱柱的直径和长度，使用的相对多的流动相。然而，当色谱柱上样量加大时，往往会导致柱效急剧下降而得不到纯的产品。制备色谱，要解决容量与柱效之间的矛盾。因此，制备柱的特点往往是： 柱长短、内径大、呈圆饼状。 常用制备柱的柱长与分析柱相仿,一般为20 —50cm ,,而内径为10 —1 000mm ,因此可以在较大的流速下不致产生很高的柱压降,从而获得高的产率。 填料颗粒小，分布窄。 采用直径为10 —20μm 的细颗粒,孔径及粒