六溴环十二烷（HBCD）和菲（PHE）对菲律宾蛤仔毒性效应与污染检测技术的研究.pdfVIP

谨以此论文献给我的父母、导师、朋友和所有关心 海洋生态环境监测保护事业的朋友们！ 张辉 六溴环十二烷(HBCD)和菲(PHE)对菲律宾蛤仔 毒性效应与污染检测技术的研究 摘 要 随着我国社会经济的高速发展，大量的污染物从陆地涌入近海，我国面临着 海洋污染这个环境问题的巨大挑战。污染物在海洋生物体内的累积效应不仅会危 及生物体本身，通过食物链传递最终可能会威胁人类的健康。 六溴环十二烷（HBCD ）是一种应用广泛的溴系阻燃剂，被发现在环境和动 物体内普遍存在，由于其具有蓄积性和持久性，被认为是潜在的持久性有机污染 物（POPs ）。多环芳烃（PAHs ）是一类持久性有机污染物，随着海洋PAHs 污染 日益加剧，其对海洋生物的毒性研究已成为热点问题。菲（PHE ）是具有湾结构 和 K 区域的最小的多环芳烃分子，所以常被作为研究多环芳烃的模式化合物。 为了研究 HBCD 和 PHE 对水生动物的毒性效应和它们在环境样品中的监测方 法，我们开展了一系列工作。本研究以我国浅海重要经济贝类菲律宾蛤仔 （Venerupis philippinarum）为研究对象，研究了HBCD 和PHE 对菲律宾蛤仔的 亚慢性毒性效应（解毒代谢系统，抗氧化防御系统和大分子损伤），通过构建差 异消减文库的方法筛选分子水平生物标志物，并采用酶联免疫方法（ELISA ）初 步建立了检测环境中菲含量的灵敏快速的试剂盒方法，为海洋环境污染监测和水 产品安全评价提供技术支持。 1. 六溴环十二烷（HBCD）对菲律宾蛤仔毒性效应与生物标志物筛选的研究 为了研究HBCD 对菲律宾蛤仔的毒性效应，本章测定了以下几种生物标志物 的变化 (i) 解毒代谢酶（EROD, GST, SOD ）；(ii) 非酶抗氧化小分子（GSH ）; (iii) 氧化压力指标（LPO, DNA 损伤）。HBCD 胁迫（0.086, 0.86, 8.6 μg/L）后1-, 3-, 6-, 10-, 15d 取样。结果表明鳃丝和消化盲囊组织中解毒代谢酶在不同处理组中均被 诱导，且消化盲囊比鳃变化敏感。鳃和消化盲囊组织中的EROD 和GST 活性的 峰值均出现在第10 天，被极显著诱导(p 0.01)。鳃中SOD 活性随浓度升高而增 强，消化盲囊SOD 值在第10 天后出现高浓度处理组较中浓度处理组低的现象。 两种组织中GSH 含量均表现出时间-剂量依赖效应。鳃和消化盲囊的DNA 损伤 程度与染毒浓度呈负相关。F 值在实验前6 天逐渐下降至最低值，然后DNA 启 i 动了自我修复机制，6 天后至实验结束又逐渐上升。鳃和消化盲囊中MDA 含量 均于第6 天出现峰值。总而言之，不同组织不同生物标志物的变化趋势不同，这 与污染物的种类、浓度和取样时间有关。GSH 的线性变化关系良好，可以考虑 作为 HBCD 污染胁迫下蛤仔体内生理生化指标变化的标志物。从各个生物标志 物在污染胁迫下受到不同程度损伤可以看出，HBCD 在环境相关浓度下对双壳贝 类具有毒性效应。该结果可以为HBCD 的环境毒性评估提供数据支持。 利用抑制性消减杂交（SSH）技术构建了HBCD （8.6μg/L）胁迫下菲律宾蛤 cDNA 800 315 仔鳃组织正、反向 消减文库，共得到 个克隆，其中 个单克隆。 正向文库158 个单克隆，核苷酸平均长度473.35bp ，基因新型率40.10% ；反向 文库157个单克隆，核苷酸平均长度450.46bp ，基因新型率48.60% 。GenBank 序列号为 JK729382- JK729426 。利用序列分析软件BlastX 和BlastN 对单一基 11 9 因进行功能分类，正向文库包含 个功能大类，反向文库包含 个功能大类。 根据基因的新型率和与免疫、解毒代谢