生物：5.1《dna的粗提取及鉴定》课件(新人教版选修1).pptVIP

专题5DNA和蛋白质技术 课题1.DNA的粗提取与鉴定 1、当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。 2、DNA不溶于95%的酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以纯化DNA。 3、 DNA与二苯胺（沸水浴）反应生成蓝色物质。 一、实验原理 一、实验原理： 1．DNA的溶解性： 思考题1：DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？ DNA在氯化钠溶液中的溶解度，随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0．14mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出； 思考题2：利用什么原理来将DNA与蛋白质分离开？ 2．DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解 ，但对 没有影响。大多数蛋白质不能忍受 ℃的高温，而DNA在80 ℃以上才会变性。 能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 3．细胞在 中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂，据此可得到含有核DNA的溶液。 4．DNA的鉴定： 思考题3：依据什么原理来鉴定DNA？ 二、实验材料：鸡血细胞液 思考：能否选用牛、羊、马血做实验材料？为什么？ 不能。因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，仅靠白细胞和淋巴细胞中的少数DNA，在实验中很难提取到。 三、实验步骤： 1．制备鸡血细胞液： 在鸡血中加入质量浓度为0．1g/mL的 溶液，离心处理； 2．提取鸡血细胞的细胞核物质： 向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、过滤； 思考：加入蒸馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？ 加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA；蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂。 3．溶解细胞核内的DNA： 加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态； 4．析出含DNA的黏稠物： 加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌； 思考：此时加入蒸馏水的目的是什么？ 使氯化钠溶液浓度接近0．14mol/L，使DNA最大限度地析出。 5．滤取含DNA的黏稠物：过滤； 思考：这次过滤与上次过滤的目的一样吗？为什么？ 不一样；这次过滤是为了去除溶于氯化钠溶液的杂质，而上次过滤是为了去除破裂的细胞膜等物质。 6．将DNA的黏稠物再溶解： 加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态； 7．过滤含有DNA的氯化钠溶液：过滤； 思考：这一步骤的目的是什么？ 除去含有DNA滤液中的杂质； 思考：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质； 用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。 因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。 8．提取含杂质较少的DNA： 加入冷却的95%的酒精，搅拌； 思考：这一步骤的目的是什么？ 去除溶于酒精的杂质； 思考：为什么加入的酒精需要冷却的？ 可抑制核酸水解酶的活性，防止降解DNA；凝集DNA；减少DNA链的断裂。 9．DNA的鉴定： 取两支试管，各加入0．015mol/L的氯化钠溶液5mL，一支加入提取的DNA，两支各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后置于沸水中加热。 思考题：为什么要设置对照组？实验中能观察到什么现象？ 确定二苯胺不与氯化钠发生颜色反应；实验组试管中可看到溶液变蓝色 方法步骤 加入物质 目的 1 . 制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 ① 2 . 提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水 ② 3 . 溶解细胞核内的 DNA 2 m1 ／ L 的 NaCI 溶液 40 mL ③ 4 . 析出含 DNA 的黏稠物 蒸馏水 ④ 5