WBC分类记数剖析.docVIP

考核项目五 WBC分类记数 【学习目的和要求】 1． 掌握WBC分类记数的操作方法。 2． 了解WBC分类记数的临床意义。 【器材】 采血针、显微镜、载物片、分类记数器、吸管、染色液、缓冲液、干棉球、酒精棉、碘酒、保定台或保定柱等。 一、血液检验 (一)血液的采取 血液的采取采血的部位和方法,根据检验项目、所需血量和动物种类的不同,可分为毛细血管采血、静脉采血和心脏采血。常用血检项目中除血沉测定和红细胞压积测定需较多量血液外,其他各项测定均可在耳尖、耳缘及耳静脉处按毛细血管法采血。 1、毛细血管采血法 常用血液检验项目中除血沉测定和红细胞压积测定需较多量的血液外，其他各项测定用血量较少，均可在耳尖、耳缘及耳静脉处按毛细血管法采血。采血前，先将局部剪毛，要尽量剪短，再用酒精棉球消毒，待酒精挥发、干燥后，用消毒的干燥针头迅速刺入消毒部位约2～3mm深，让血液自然流出。如血液不易流出时，可在刺入部的上方稍加按压，但勿用力强挤，以免混入过多的组织液。开始流出的第1滴血，可用于制作血片；然后用干棉球擦去局部的剩余血液，利用重新流出的第2滴血液作红、白细胞计数和血红蛋白测定；若利用第3滴血液时，仍然要将第2滴血液的剩余部分擦干，使局部皮肤干燥，否则以后流出的血液易分散，不能形成滴状，不易吸取。对犬、猫等小动物耳缘采血时，可在局部剪毛、消毒后，涂布一层凡士林，然后在局部刺入，流出的血液易成滴状，便于吸取。利用毛细血管血液时，取血动作要迅速，可做多项测定，如果操作不熟练，动作缓慢往往引起血液凝固。利用毛细血管血液作多项测定时，一般应先作红细胞计数测定，后作血红蛋白或白细胞数测定。 2、静脉采血法 马、牛、羊可由颈静脉采血（具体部位和方法，见注射法部分）。猪可由前腔静脉采血（详见注射法部分）。鸡可由翼下静脉采血，即用细针头刺入翼下静脉后，任血液自行流出并将其接入试管中。犬、猫可利用小腿外侧跖背外侧静脉或前臂内侧皮下静脉。局部剪毛消毒后，用止血带扎住采血部上端或由助手握住采血部位近心端，使静脉怒张，用消毒、干燥的注射器接上针头，针头斜面向上，先以约30度角穿刺静脉前2～3mm处的皮肤，然后再穿刺静脉壁入静脉腔，待见有血液流入注射筒内后，将针头顺势向静脉腔内推入少许，以防动物骚动时针头滑出静脉。用右手食指将针头固定，左手慢慢抽血，抽血时不可过分用力，以免引起溶血。待抽至所需血量后，先放松止血带，再用消毒棉球按住伤口，拔出针头。除去注射器上的针头，将血液沿管壁缓缓注入清洁的试管内。需抗凝血液时，试管内应加抗凝剂，并立即混匀，以免凝固。 3、心脏采血法 多用于鸡及实验动物需多量血液时。鸡可由胸腔入口处向心脏刺入，刺入心脏时，由于心腔压力较静脉高，血液可自然涌入注射器，兔及鸡等亦可在左侧胸部第1、2肋间，摸到心搏动明显处，针头与胸壁呈垂直方向缓缓刺入，针头进入心腔内时，血液可自然进入注射器。 （二）血清快速分离法 如需迅速分离血清（特别对牛），可将盛血管放入离心机内，以2,500r/min的速度离心3min，使红细胞与血浆分离，然后放入37℃温箱内30min促使血块加速凝固、收缩，可迅速分离到较多的血清。 （三）血液抗凝法 供检血最好采取后随即进行检验。若不能立即检验，为防止血液凝固，可加入抗凝剂，并应充分混合之。常用的抗凝剂有： （1）草酸钠是最常用的抗凝剂，为白色粉末状，每1.5～2.0mg可抗凝1.0ml血液，可用于血液常规检验。但因其对红细胞大小有影响，故不能用作红细胞压积测定，如需测定红细胞压积时，可用双草酸盐抗凝剂或乙二胺四乙酸二钠。 （2）双草酸盐抗凝剂：草酸钾0.8g；草酸铵1.2g；蒸馏水加至100.0ml。溶解后，吸取0.5ml，加于供采血用的试管或小瓶中，置干燥箱内（温度不能超过80℃），烘干备用（实际含双草酸盐10mg，可供5ml全血抗凝用）。 （3）3.8％枸橼酸钠溶液主要用于血沉测定时的抗凝。 （4）乙二胺四乙酸二钠（EDTA二钠）每10mg可使5ml全血抗凝；或配成10％溶液，每2滴可使5ml全血抗凝。 怀疑传染病时，采血过程应防止到处流散，检后的残余血液及所用器皿亦应进行消毒处理。 二、白细胞分类计数方法 以百分率表示各种类型白细胞间的数量关系,称为白细胞分类计数。 (一) 原理 白细胞分类计数法是将血液制成分布均匀的薄膜涂片，用复合染料染色，根据各类白细胞着色特征予以分类计数，得出相对比值（百分率），以观察数量、形态和质量的变化，对疾病有辅助诊断意义。 (二) 器材与试剂 载玻片、染色盆及支架、染色缸、洗瓶、显微镜及镜油、白细胞分类计数器、吸水纸等。 1、瑞（Wright）氏染液 瑞氏染粉0.lg，甲醇60.0ml。将染色粉置于研钵中，加少量甲醇研磨，使其溶解，然后将已溶解的染液倒入洁净的