2.1 微生物的实验室培养 导学案 2.docVIP

2.1 微生物的实验室培养 导学案 2 【本节目标解读】 【课程目标】了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作. 【课题重点】无菌技术的操作 【课题难点】无菌技术的操作 【基础知识】 一、培养基 1．概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基.可分为 培养基和 培养基. 2．分类方式： 分类标准 类 型 备 注 培养基的 培养基、 培养基和半固体培养基 培养基中加入凝固剂(有琼脂、明胶、硅胶等)即为 培养基. 培养基实验室中最常用的培养基之一 微生物的种类 细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养 培养基的 特殊用途 基础培养基、加富培养基、选择培养基和鉴别培养基 选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基. 鉴别培养基：是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物.如鉴别大肠杆菌的伊红美蓝培养 基，鉴别纤维素分解菌的刚果红培养基. 3．营养构成：各种培养基一般都含有 、 、 和 ，此外还要满足微生物生长对 、 以及 的要求. 4．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 、培养霉菌时需将培养基PH调至 、培养细菌时需将PH调至 、培养厌氧微生物则需提供 条件. 5．E.coli指 . 〖思考1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？[ 【补充】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量.氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等.含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等. 二、无菌技术： 1．关键 防止 的入侵.围绕如何避免杂菌的污染展开. 2．无菌技术 (1)对实验操作的 、操作者的 和 进行 . (2)将用于微生物培养的 、 和 等器具进行 . (3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行. (4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触. 〖思考2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？ 3．比较消毒和灭菌 消 毒 灭 菌 概念 用较 的物理或化学方法杀死物体的 部分微生物(不包括芽孢和孢子) 用较 的理化因素杀死物体 微生物(包括芽孢和孢子) 常用方法 消毒法( 消毒法)、 消毒法、紫外线消毒法 灼烧灭菌、 灭菌、 灭菌 适用对象 操作空间、液体、双手等 接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等 〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？ 〖思考4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 ，温度为 ，并维持 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 时打开锅盖，其目的是防止 . 三、实验操作(大肠杆菌的纯化培养) (一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1．计算：根据 比例，计算100mL培养基各成分用量. 2．称量：牛肉膏较黏稠，可用玻棒挑取，同 一同称量.称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分. 3．溶化：加水加热熔化牛肉膏与称量纸→取出称量纸→加入蛋白胨和氯化钠继续加热→加入 →用蒸馏水定容到100mL(整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂). 4．灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用 灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用 箱灭菌. 5．倒平板：待培养基冷却至 左右时在 附近操作进行. 其过程是： ①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞； ②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火