5-氮杂胞苷对马氏珠母贝早期发育的影响.pdf

第 23卷 第 5期 海南热带海洋学院学报 Vo1．23No．5 2016年 l0月 JournalofHainanTropicalOceanUniversity 0ct．2016 5一氮杂胞苷对马氏珠母贝早期发育的影响 李耀 国，孙 彤，张雅剑，巩建豪 (海南热带海洋学院生命科学与生态学院，海南 三亚572022) 摘要：为了解5一氮杂胞苷对马氏珠母贝早期发育的影响，该研究检测并分析了其对早期发育阶段甲基化水平和矿化 基因表达的影响．结果显示5一氮杂胞苷处理可引发基因组甲基化水平显著降低．5一氮杂胞苷处理亦使DNMT3的表达量 低于海水处理组，而矿化基因nacrein的表达量高于海水处理组．DNMT3和nacrein的表达呈显著正相关(R =0．755，p= 0．000)．基因组甲基化水平的改变可能是调控生物矿化过程的重要因素． 关键词：马氏珠母贝；去甲基化试剂；早期发育 ；甲基化水平；生物矿化 中图分类号：$91 文献标识码：A 文章编号 ：1008—6722(2016)05—0005—06 DOI：10．13307／j．issn．1008—6722．2016．05．02 0引言 生物体的表型变化主要由DNA序列的变异引起 ，除了常见的A、T、C、G四个脱氧碱基的变异外 ，一种 表观遗传DNA甲基化修饰引起了科研工作者的广泛关注．这种 DNA甲基化修饰表现为甲基化转移酶将 序列中胞嘧啶加上一个甲基基团，使胞嘧啶成为 “5一甲基胞嘧啶”_lj．5一甲基胞嘧啶主要发生在 “CpG” 二核苷酸或者其它类型位点如 “GpC”中的胞嘧啶上 J．动物中胞嘧啶甲基化在非编码DNA区域 (内含 子、重复元件和活性转座子元件)的失活中起到重要作用，并能通过引起染色质结构、DNA构象及DNA与 蛋 白质相互作用方式的改变来影响基因表达，是大多数生物生长发育过程中不可缺少的一部分 ． 甲基化敏感扩增多态性技术 (MSAP，methylationsensitiveamplificationpolymorphism)是一种可对基因 组 “5一CCGG一3”’位点胞嘧啶甲基化状态进行检测的常用方法．其原理主要是根据 a 和MspI这两 种同裂酶对基因组 “5一CCGG一3”’双链位点中胞嘧啶甲基化状态不同而具不同酶切活性，可比较不同酶 切反应对应PCR产物的电泳图谱来分析样品甲基化状况．坳0Ⅳ酶可以酶切 “5一CCGG一3”’单链外部胞 嘧啶甲基化序列，而MspI酶可以酶切 “5一CCGG一3”’双链 内部胞嘧啶甲基化序列 』．MSAP技术已广泛 应用于基因组甲基化水平检测，DNA甲基化与杂种优势的关联分析 以及 DNA 甲基化与生物抗性的关 系分析等 ． 多数非脊椎动物甲基化在基因组中的分布呈一种 “镶嵌模型”，即甲基化修饰的 “CpG”位点散布于整 个基因组中 J．其中双壳贝类 DNA甲基化主要存在于基因内含子及外显子上 ，基因的DNA甲基化与其 表达调节相关，其中免疫相关基因常呈现出点缀分布的甲基化状态 1．贝类甲基化的研究报道较少，主要 集中于太平洋牡蛎和马氏珠母贝两个物种中．太平洋牡蛎甲基化的基因与基因高转录丰度及组织问低表 达变异存在关联，同源盒型基因的甲基化可使基因表达水平下降，DNA甲基化与基因组具有一定关联性 并对早期发育产生影响 一 ．马氏珠母贝(Pinctadafucata)是广泛分布于中国广东、广西、海南省及 日本沿 海的具重要经济价值的珍珠贝．其组织甲基化水平范围为 11．71至 14．71％，免疫相关基因galectin启动 收稿 日期：2016—10—05 基金项 目：海南 自然科学基金面上项 目；海南热带海洋学院学科 带头人和博士科研启动基金项 目 (RHDXB201620) 作者简介：李耀国(1986一)，男，湖南湘乡人，海南热带海洋学院生命科学与生态学院讲师，博士，研究方向为水产动物 分子育种与资源保护． 第23卷 第5期 海南热带海洋学院学报 子区甲基化水平与基因的表达水平呈显著正相关，而基因组 甲基化水平与galectin基因的表达水平呈负相 关l1 j．目前对马氏珠母贝DNA 甲基化的研究主要集中于对其基因组