Box-Behnken响应面法优化组织破碎提取龙胆苦苷.pdf

2016年 6月 中成 药 June2016 第38卷 第6期 ChineseTraditionalPatentMedicine V01．38 No．6 Box-Behnken响应面法优化组织破碎提取龙胆苦苷 程振玉， 杨英杰 ， 成乐琴， 于丽颖， 沈启慧， 张 俭 (吉林化工学院化学与制药工程学院，吉林 吉林 132022) 摘要：目的 采用Box—Behnken响应面法优化组织破碎提取龙胆苦苷。方法 以龙胆苦苷提取率为指标，在单因素试 验的基础上，通过 Box—Behnken响应面法对提取工艺进行优化。结果 最佳条件为药材粒径80目，料液 比1：30，电 压 150V，乙醇体积分数70％，提取时间35s，龙胆苦苷提取率达到5．37％。结论 该方法快速高效，可显著缩短提 取时间，增加龙胆苦苷的提取率。 关键词：龙胆苦苷 ；组织破碎；提取工艺；Box—Behnken响应面法 中图分类号 ：R284．2 文献标志码 ：B 文章编号：1001—1528(2016)06—1408-05 doi：10．3969／j．issn．1001。1528．2016．06．045 龙胆草 GentianascabraBge．又名龙胆或地胆草 ，为龙 学院隋新副教授鉴定为正品。 胆科龙胆属植物龙胆的根或茎部…，主要分布在吉林 、辽 1．2 仪器与设备 P230型高效液相色谱仪，配有 uV一230 宁、黑龙江和内蒙古等东北地 区。药理研究表 明，其生物 紫外检测器 (大连依利特分析仪器有限公司)；FA1004型 药效物质基础主要为龙胆苦苷 ，该成分在抑制恶性肿瘤形 电子天平 (上海舜宇恒科仪器有限公司)；SY．800超声波 成、消除炎症、促进健 胃消食、抗病原微生物、抗氧化和 清洗器 (上海宁商超生仪器有限公司)；JHBE-50S型闪式 镇痛等方面发挥了重要作用 ，显示出明显的药理活性 。 提取器 (河南金鼎科技发展有限公司)；RT-08型多功能粉 因此，研究龙胆苦苷的提取方法，使其提取率最大程度增 粹机 (荣聪精密科技有限公司)；RE-52A型旋转蒸发仪 加，对相关新药研发具有重要的现实意义。 (上海亚荣生化仪器厂)；SHZ—D型循环水式真空泵 (河南 龙胆苦苷的传统提取技术大多采用 回流法或连续 回流 省巩义市英峪仪器一厂)。 法 ，耗时长 ，温度高，而且提取率低 ，严重影响了这一 1．3 方 法 药用资源的充分利用。近几年随着提取技术的不断发展与 1．3．1 HPLC条件 HypersilODSC】8色谱柱 (4．6mm × 完善，组织破碎法 等新方法已逐步应用到天然产物化学 250131nl，5 m)；进样量 20XIL；体积流量 1．0mL／min； 研究领域 ，在中药药理成分提取和样品前处理中发挥 了显 检测波长 270nm；柱温 25℃；流动相 乙腈 (A)-0．4％磷 著作用 ，可大幅缩短提取时间，减少溶剂用量 ，而且 目标 酸 (B)，梯度洗脱 (0～10min，5％ 一28％A；10— 产物提取率明显增加 ，但迄今鲜有运用该方法对龙胆草 16min，28％ ～30％A；16～16．1min，30％ ～100％A，保 中龙胆苦苷进行提取的研究报道。响应面法是一种对工艺 持 14min；30～30．1min，100％一5％A，保持 15min)。 参数进行优化的有力手段和技术 ，在改善精度、提高预测 1．3．2 标准曲线的绘制 取置于干燥器 中48h以上的龙 性 、简便准确处理大量数据方面，具有正交试验等一般方 胆苦苷标准品，精密称取 11．40mg，甲醇溶解，摇匀，定 法无法比拟的优点，在中草药、食品、化学化工等领域的 容到25mL量瓶中，得到456．0 mL标准品贮备液。吸 应用越来越广泛 “J。本实验在单因素试验的基础上，采