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广西医科大学学报 2011Jun；28(3) 仁与抗原反应 。我们在实验 中借鉴该经验 ，增加核膜通透 在肝组织石蜡切片中行 8-OHdG免疫组化染色采用文 中的 性 。Maier等Is]用免疫组化检测转基因小 鼠甲状腺组织冰冻 实验条件 3结果最为理想，希望对 以后 的科研工作能有所帮 切片中8—0HdG的水平 ，未做特殊抗原处理。其一抗与本方 助 。 法所采用的一抗相同，参照 Maier的条件 ，即条件 1，在 HCC 参考文献 ： 石蜡切片中并不能得到理想结果 ，整个视野细胞核为苏木精 复染的蓝色，未见有棕黄色的细胞核 。分析其原因，可能与 Eli LiuZhiming，LiLequn，PengMinhao，eta1．HepatitisB 肝组织的一些特点有关 ：①肝细胞蛋 白及糖代谢 旺盛 ，肝细 virusinfectioncontributestOoxidativestressinapopu— 胞内蛋 白及糖类含量高 。常规抗原修复方法难 以奏效 。② lationexposedtOaflatoxinB1andhighriskforhepato— 肝组织 内源性生物素含量高，容易导致背景深 染。③8一 cellularcarcinoma[J]．CancerLett，2008，263(2)：212— oHdG有其 自身特点，即 8一OHdG是核酸而非蛋 白，主要存 222． 在于细胞核 ，少量存在于线粒体。同时，冰冻切片与石蜡切 [2] 苏 浩 ，朱广志，林洪强，等．肝动脉灌注化疗后肝细胞 片的免疫组化略有差异 。但是当仅用蛋 白酶 K来修复抗原， 癌 8-OHdG，p53和 p21wafl／cipl的表达研究 [J]．中华 即条件 2，也未能做 出阳性结果 。这可能与 8-OHdG免疫组 普通外科杂志 ，2009，24(10)：795—798． 化的 自身特殊性有关 。因此 ，常规用于抗原修复无法使抗原 [33 NishikawaT，Nak~imaT，KatagishiT，eta1．Oxida— 得到充分暴露 。 tivestressmayenhancethemalignantpotentialofhu— 在总结前人经验的基础上 ，采用 了高温高压柠檬酸盐 man hepatocellularcarcinoma by te[omeraseactivation (pH6．0)缓冲液+ 胃蛋 白酶 K(10rag／L)的联合修复方法 ， [J]．LiverInternational，2009，29(6)：846—856． 并采用 1 TritonX-100打孔过夜 的方法 ，即采用条件 3，得 -[43 邓 娟 ，周华东，陈曼娥 ，等．局灶性脑缺血一再灌注大 到 了理想的结果。胃蛋 白酶 K37℃ 40rain，去除了细胞质内 鼠神经元 DNA氧化损伤 的研究[J]．中国危重病急救 过多糖原及蛋 白的影 响。结合 HCC组织 自身特 点，采用双 医学 ，2001，13(8)：478—480． 重抗原修复[6]，同时将 TritonX-100的浓度提高至 1 ，并采 E5] MaierJ，vanSteegH，vanOostromC，eta1．Deoxyribo— 用 同一抗一起 4℃过夜的方法 ，更有利于一抗透过核膜。条 nucleicAcid DamageandSpontaneousMutagenesisin 件 4的可疑阳性结果，考虑与一抗透过核膜不彻底所致。综 theThyroidGlandofRatsandMice[J]．Endocrinology， 合 以上分析 ，条件 3是该抗体在肝组织石蜡切片行 8OHd