光镜与电镜技术--我的一点试验心得一般生物体是不透明-中国试剂网.PDF

中国试剂网 6.3.3.1 光镜与电镜技术--我的一点实验心得 一般生物体是不透明的，不能直接在显微镜下观察其内部结构 λ 经过特殊的手段，减少体积和厚度，使光线能透过。 基本原则：保持其原有的组织结构和相互关系。λ 制片方法的种类 切片法λ 石蜡切片法、冰冻切片法等 优点：组织间的各种构造能保持正常的相互关系 缺点：切成薄片，不能看到完整的组织 非切片法λ 整体封藏法：单胞藻、鸡胚、菌类等 涂片法：血涂片 压碎法：染色体 优点：操作简单，保持每个单位 （组织）完整 缺点：由于受到压迫等，组成部分的正常位置关系有所变动 切片法的主要步骤 （石蜡切片法） 取材λ 固定λ 冲洗、脱水与透明λ λ 透入与包埋 切片与贴片λ 染色λ 封片与观察λ 取材 活体取材 材料的新鲜：动物体死亡后，会产生一些变化 （自溶）λ λ 动物杀死的方法：避免使动物长时间陷于痛苦和濒于死亡的状态，以免 使动物的组织细胞成分结构发生变化，或引起病理假象。 中国试剂网 6.3.3.1 取材的要领 λ 迅速：减少组织细胞的死后变化 实验前对所取组织的结构、部位有明确的了解 熟练 λ 避免机械损伤：细胞、组织的变形 组织块大小适中：与固定液有关λ 一般厚2~5 毫米，长、宽不超过1.5X1.5 毫米 保持材料的清洁λ 用生理盐水冲洗组织块上的血液、污物和黏液等 总之：尽量保持所取组织块在自然状态下的形态、结构。λ 固定与固定液 固定的目的 迅速阻止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐败λ λ 使细胞内的蛋白质、脂肪、糖等成分变为不溶性物质，以保持其原有状 态 λ 使组织内各种物质成分产生不同的折光率，以便染色后易于鉴别和观察 使组织块硬化，便于制作薄片，并在以后的过程中不易损坏λ λ 使不同的组织成分对染料有不同的亲和力 固定的对象 主要是蛋白质λ 固定液的性质 λ 有强的渗透力，能迅速渗入组织内部 不使组织过度收缩或膨胀，并使组织内欲观察的成分得以凝固为不溶性物 质λ λ 使组织达到一定的硬度，并获得最佳的折光率、对某种染料的亲和力 固定的注意事项 组织块不宜过大λ λ 固定液的量以组织块大小的20 倍为宜。 最好能使固定液从上下左右前后同时渗入组织块λ 中国试剂网