真菌毒素检验标准方法草稿.docVIP

`前 言 本标准适用于粮食籽粒中真菌毒素检验和鉴定。 本标准编制按GB/T 1《标准化工作导则》和GB/T 20001《标准编写规则》进行。 本标准由连云港市产品质量监督检验所提出。 本标准由连云港市产品质量监督检验所负责起草。 本标准主要起草人：周翔 、陈梦 、朱孔岳、徐颖 本标准于2012年 月首次发布。粮食籽粒中真菌毒素液质色谱检验方法 范围 本标准规定了粮食籽粒中真菌毒素液-质色谱检验方法。 本标准适用于植物籽粒中真菌毒素检测。 本标准检出限为： 黄曲霉毒素B1（AFB1）0.025μg/kg黄曲霉毒素B（AFB）0.12μg/kg黄曲霉毒素G1AF G1）0.03μg/kg 黄曲霉毒素G2AF G2）0.5μg/kg 黄曲霉毒素M1（AFM1）0.03μg/kg脱氧雪腐镰刀菌烯醇DON）0.05μg/kg 伏马菌素FB1） 0.025μg/kg T -2 毒素0.019μg/kg 玉米赤霉烯酮ZON ）0.006μg/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 20001.4-2001 标准编写规定 实验原理 利用真菌毒素在不同极性溶剂的溶解度差异，对真菌毒素提取和富集，采用超高效液相色谱分离组分，经三重四级杆质谱轰击分子生成离子，对离子碎片分离鉴定获得准确的检验量值和定性结果。 3　设备3.1? 低温冷冻高速离心机。3.2? 电动试管振荡器。3.3　恒温水浴箱。3.4　 3.5　3.6 拍打式均质器3.7 冰箱 3.8?全支消毒自动加液器（带滤头） 3.9　　试剂及黄曲霉毒素Aflatoxin B1（纯度99%）黄曲霉毒素Aflatoxin B2（纯度：99%）黄曲霉毒素Aflatoxin G1（纯度：99%）黄曲霉毒素Aflatoxin G2（纯度：99%）黄曲霉毒素Aflatoxin M1（纯度：98.5%）伏马菌素Fumonisin (FB，纯度：99% ) T -2 毒素（纯度：98%） 玉米赤霉烯酮 Zearalenone(ZON，纯度：99.5%),脱氧雪腐镰刀菌烯醇Deoxynivalenol (DON，纯度：99.5%)甲醇（色谱纯）醋酸铵（分析纯）甲酸（分析纯）三氯甲烷（分析纯）超纯水 固相萃取柱：Agilent LC-18，3ML 质谱条件 电离模式:ESI+ 毛细管电压：4kV；雾化气压力：40psi；离子源温度：100℃；锥孔电压：135v；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流量：9L/min； 质量分析器：八级杆离子导引电压：600v；碰撞池压力：450v;出口电压：-7V；入口电压：1V；扫描范围：50-2000；真空度：2.92E-6 Torr 检测器电压：-10kv；EMV:1540V;delta EMV:300V色谱条件 色谱柱：Agilent XDB-C18 柱 2.1×50 mm 粒径1.8μm柱温：室温进样体积：5μL流速：0.3mL/min流动相A：10mM 醋酸铵溶液（加0.1%甲酸），流动相B：甲醇（加0.1%甲酸）色谱梯度洗脱条件：35% B(0 min), 85% B(8min), 100%B（10min），100%B（12min），35% B(13min)。真菌毒素的母离子及定性定量离子的质谱条件见表标准溶液配制 用甲醇将各真菌毒素标准品分别配制成1μg/ml标准储备液（黄曲霉毒素M1标准品用氯仿配制），在0℃以下避光保存；临用前用甲醇/10mM 醋酸铵(50/50)溶液稀释标准储备液，配制浓度分别为：0.5、1、2、5、10、20、50ng/mL 的标准工作溶液。 样品制备?固体样品粉碎拌匀过筛后，准确称取20g于250mL 的锥形瓶中, 加入60ml甲醇溶液，超声30分钟，静置片刻，过滤于旋转烧瓶中，再加入40ml甲醇溶液，超声30分钟，静置片刻，过滤于同一旋转烧瓶中。将旋转烧瓶于水浴中旋转蒸干。用甲醇溶液准确定容到10ml。吸取2ml定容后的液体，过c-18柱，10ml甲醇溶液洗脱。将洗脱液蒸至近干，再用氮气吹干后，吸取甲醇/10mM 醋酸铵(50/50)定容到2ml。再用0.22μm 微孔滤膜过滤, 以备进样。 ........................(1) 式中： X----样品中毒素含量，单位为毫克每千克（mg/kg） A样----样品峰面积 A标---标液峰面积 C---标液浓度，单位为微克每毫升（μg/ml） V---样品定容体积，单位为毫升（ml