Oct4,Sox2,Nanog和c-Myc基因在蚯蚓发育早期的表达.pdfVIP

第6卷第2期 热带生物学报 Vol，6No．2 OFTROPICALBIOLOGY Jun．2015 2015年6月 JOURNAL 文章编号：1674—7054(2015)02—0134—07 在蚯蚓发育早期的表达 郑鹏飞1，刁晓平1’2，宋芹芹1，杜俊俏3，程华民1，王海花1，张禹3 (1．海南大学农学院，海南2．海南大学海口市环境毒理学重点实验室，海南海口570228； 3．海南大学环境与植物保护学院，海南海口570228) 摘 要：通过已知物种的干细胞多能性基因核酸序列，利用同源序列法，成功克隆得到赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)的Oct4，Nanog，so娩和c—Myc4个基因，并通过实时荧光定量PCR分析了上述4个基因在赤子爱胜蚓 茧孵化期间的表达情况。结果表明：赤子爱胜蚓茧在孵化期0—21d，4个基因呈相似的规律，表达量均逐步 升高，在21d达到峰值；在幼虫期Oct4，Nanog和c—Myc3个基因的表达量高于孵化期。结果表明，上述基因 在赤子爱胜蚓早期发育过程中表达模式具有一定的相似性。 关键词：赤子爱胜蚓；Sox2；克隆；发育；Oct4 中图分类号：Q959．1 文献标志码：A stem 成功获得了小鼠的诱导多能干细胞(iPSC，induced cells)…。由此引发了多能性基因参与 pluripotent 干细胞多能性维持机理的研究，并成为干细胞研究领域关注的热点。参与调控干细胞全能性的基因也称 中的部分细胞具有多能性，而Oct4，Nanog和Sox2是影响胚胎发育和分化的关键基因[2J。小鼠胚胎干细 在鸡胚原始生殖细胞发育过程中，Sox2的表达量随着原始生殖细胞的分化而逐渐降低。斑马鱼Oct4的同 源基因Pou5fl／Pou2，从受精卵到原肠胚晚期一直有持续的表达，且囊胚期的表达远远高于成体细 stem 胞M-5]。Nanog属于NK基因家族，体外只在未分化的胚胎干细胞(embryoniccell，ES)和胚胎生殖 (Embryonicgerm，EG)细胞中表达，诱导分化时，表达量下降M。8J。蚯蚓具有调节土壤微生物的菌群和富 集重金属等作用一叫0|。目前，关于蚯蚓的研究主要集中于生态风险评价，而对蚯蚓的发育及再生过程研 究较少，特别是蚯蚓的早期发育，国内外均鲜有报道。由于蚯蚓尚未完成全基因组测序，目前还没有蚯蚓 干细胞多能性基因的报道ⅢJ。笔者通过已知物种的干细胞多能性基因核酸序列，利用同源序列法克隆赤 4个基因，并通过实时荧光定量PCR检测上述基 子爱胜蚓(Eiseniafoetida)的Oct4，Nanog，Sox2和c—Myc 因在赤子爱胜蚓茧早期发育过程中的表达情况，旨在揭示其在蚯蚓早期发育期间全能性的变化，为阐明 蚯蚓早期胚胎发育分化的分子调控机理提供参考。 1材料与方法 1．1 实验材料 1。1．1 mg、成 收稿15t期：2015—04—15 基金项目：海南省普通高等学校研究生创新科研课题($201305) 通信作者：刁晓平，女，教授，博士生导师．研究方向：海洋和土壤生态毒理学．E-mail：diaoxip@hainu．edu．cn 第2期 郑鹏飞等：Oct4，Sox2，Nanog和c—Myc基因在蚯蚓发育早期的表达 135 熟、健康，具有明显生殖环带的赤子爱胜蚓，置于含有发酵牛粪配置的土壤中，育养1周后，通过翻检土 壤，得到新鲜产出的蚯蚓茧，之后将蚯蚓茧置于垫有湿润滤纸的聚乙烯培养皿中，盖上扎有1mm小孔的 盖子，放置在恒温恒湿培养箱中，气温(204-1)。C，湿度60％～70