布鲁氏菌主要外膜蛋白基因的克隆、表达及蛋白纯化.pdfVIP

布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella)感染引的重要的人畜共患传染病之 一，属于二类传染病。为了研究布鲁氏菌主要的外膜蛋白和细胞凋亡的关系。本研究克 隆了布鲁氏菌外膜蛋白 Omp10、Omp16、Omp19、Omp25、Omp28、Omp31、Omp2a 基因，并将其连接到 PET32-a、PGEX4T-1 载体进行原核表达，纯化了相关蛋白。构建 了外膜蛋白的真核表达载体，并制作了外膜蛋白 Omp16、Omp19、Omp28 的多克隆抗 体。结果如下： 1 通过少量扩增布鲁氏菌，用细菌基因组试剂盒提取其基因组，设计引物，高保真 酶扩增之后，通过rTaq 酶PCR 得到末端带有碱基A 的布鲁氏菌主要外膜蛋白基因，与 pMD18T 载体连接过夜，转化，涂板，挑取克隆，摇菌，提取质粒，酶切鉴定，送交公 司测序，结果表明所克隆的目的基因与GenBank 中相应的基因序列同源性高达99%。 2 测序正确的布鲁氏菌外膜蛋白Omp10、Omp16、Omp19、Omp25、Omp28、Omp31、 Omp2a 基因，经过酶切胶回收，过夜连接，转化