原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
毕赤酵母组成型表达脂肪酶及其高通量筛选方法-微生物所期刊联合
微生物学通报 JUN 20, 2012, 39(6): 873881
Microbiology China © 2012 by Institute of Microbiology, CAS
tongbao@
主编点评文章
毕赤酵母组成型表达脂肪酶及其高通量筛选方法
朱珊珊 喻晓蔚 徐岩*
( 214122)
摘 要: 【目的】获得组成型表达脂肪酶毕赤酵母, 建立利用橄榄油罗丹明B 平板高通量
筛选组成型表达华根霉脂肪酶基因的有效方法。【方法】运用PCR 技术从pGAPZαA 表达
载体上扩增得到GAP 启动子片段, 插入到表达载体pPIC9K-proRCL 中, 构建组成型表达
载体 pGAPK-proRCL 。在保留含有同源双交换重组序列的诱导型启动子AOX1 序列的基
础上, 电转化后华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021 脂肪酶基因 proRCL 表达盒在
毕赤酵母基因组上发生双交换整合事件, 从而组成型表达单拷贝的华根霉脂肪酶基因。
【结果】重组菌发酵144 h 后, 脂肪酶最高酶活为 130 U/mL。利用橄榄油罗丹明B 平板
高通量筛选组成型表达华根霉脂肪酶基因。【结论】该方法将初筛时间从12 d 缩短为3 d,
排除了多拷贝突变株的干扰, 为后续脂肪酶的定向进化及筛选奠定了基础。
关键词: 橄榄油, 罗丹明B, GAP, 华根霉脂肪酶, 组成型表达
Constitutive expression of lipase in Pichia pastoris and the
high throughput screening method
*
ZHU Shan-Shan YU Xiao-Wei XU Yan
(Key Laboratory of Industrial Biotechnology of Ministry of Education , Jiangnan University,
Wuxi, Jiangsu 214122, China)
Abstract: [Objective] This study is aimed to constitutive express lipase in Pichia pastoris and es-
tablish an efficient method for high-throughput screening constitutive expression lipase gene in P. pas-
toris using olive oil-rhodamine B plate. [Methods] The GAP gene promoter was amplified from the
plasmid of pGAPZαA and inserted into the inducible expression vector pPIC9K-proRCL resulting in
基金项目：(No. ; 863 (No. 2010AA101501); 973
(No. 2011CB710800); (No. JUSRP11014)
*通讯作者：Tel: 86-510 : yxu@
收稿日期：2011-10-11; 接受日期
文档评论（0）