化妆品原料和生产环境中污染菌的检验.docVIP

第一节 化妆品原料的微生物检验 化妆品原料种类很多，性能各异，根据其性能和用途，大体上可分为基质原料和添加剂（辅助原料）。基质原料是组成化妆品的主体或在该化妆品内起主要功能的物质，主要包括油脂、蜡类、粉类、胶质类、表面活性剂、防腐剂、抗氧化剂等。添加剂是赋予色、香及其他特定作用的物质，大多为天然的含有营养成分或生物活性的物质，这些成分又是微生物生长繁殖的良好营养源，在一定程度上成为微生物的培养基，因此，检验原料中的微生物很重要。 一、指标菌及特定菌的选择 一般原料的微生物指标菌同化妆品成品即：菌落总数、粪大肠菌群、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌。粉类原料大多数是由土壤矿物质加工而成，而土壤受微生物污染严重。据资料报道，土壤中的致病菌有需氧的炭疽杆菌和厌氧的破伤风杆菌、产气荚膜杆菌等，其检出率很高，产气荚膜杆菌几乎达100%，恶性水肿杆菌64%，破伤风杆菌29%，肉毒杆菌6%。这些致病菌能在土壤中生存较长时间，例如炭疽杆菌的芽孢能生存15年之久；肠道致病菌可生存100～170d；结核杆菌能生存1年左右；破伤风杆菌芽孢和产气荚膜杆菌也能长期在土壤中生存。在滑石粉、高岭土、碳酸钙等粉类原料中，经常检出枯草杆菌、真菌等，因此，在粉类原料中可增加需氧芽孢杆菌、产气荚膜杆菌和破伤风杆菌指标。在某些生物性原料如动物内脏及其提取物等可增加沙门氏菌指标。 二、样品的预处理 根据原料性质的不同，选用相应的预处理方法，如油质类原料可按油性或疏水性（油包水）化妆品处理，粉类原料按粉剂化妆品样品处理等。 三、检验方法 各种微生物的检验方法均与化妆品成品检验方法相同，可参见《化妆品卫生规范》中微生物检验方法。原料与成品微生物检验方法最根本的不同点是检验原料所用的稀释液和培养基中都不含有中和剂（卵磷脂和吐温-80）。如检验菌落总数用普通营养琼脂培养基，绿脓杆菌增菌培养液可用普通肉汤，金黄色葡萄球菌增菌培养液用含7.5%氯化钠肉汤，稀释液均用生理盐水。 四、培养基 （1）营养琼脂 成分： 蛋白胨 20g 琼脂 15～20g 牛肉膏 5g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL 制法：将上述成分混合后，加热溶解，调PH值为7.4～7.6,121℃、20min高压灭菌，储存于冷暗处备用。 （2）7.5%氯化钠肉汤 成分： 肉汤 100mL 氯化钠 7.5g 制法：将上述两种成分混合均匀，分装，115℃、20min高压灭菌。 第二节 化妆品生产用水的微生物检验方法 水在化妆品的生产中用量极大，是化妆品的主要成分之一，水的品质对化妆品的质量有着重大影响。化妆品生产用水的处理一般采用过滤吸附法、电渗析法、离子交换法等，对生产用水的微生物检测指标有菌落总数、粪大肠菌群、霉菌和酵母菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌。 一、菌落总数 菌落总数是指水样在一定条件下（营养琼脂培养基，37℃,24h）需氧培养后1mL水样中所含菌落数。检验方法介绍如下。 （1）以无菌操作灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，加到灭菌的平皿内，注入约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋转平皿，使水样与培养充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。 （2）待冷却凝固后，翻转平皿，使其底面朝上，置于（36±1）℃培养箱内培养24h,进行菌落计数，即为1mL水样中的菌落总数，以（CFU/mL）报告结果。 二、粪大肠菌群 粪大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出的，是指一群在44.5℃培养24h能发酵乳糖产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。粪大肠菌群数的高低，表明了粪便污染程度，也反映了对人体健康潜在危害性的大小，是评价化妆品生产用水卫生质量的重要指标之一。因生产用水的洁净度较高，可采用滤膜法检测，即将水样通过孔径为0.45μm的滤膜过滤，细菌被阻留在膜上，将滤膜贴在MFC培养基上，44.5℃培养后，计数典型菌落。 MFC培养基 成分： 胰胨 10g 胆盐3号（Bile salt No.3）或混合胆盐 1.5g 多胨 5g 酵母浸膏 3g 琼脂